立地条件对银杏叶药用有效成分的影响

摘要： 银杏为银杏科银杏属落叶乔木，又名白果、公孙树、鸭脚树、蒲扇^[1]，是新生代第四纪冰川期的孑遗植物，素有裸子植物“活化石”之称^[2]。是我国重要的经济树种，尤其以叶的药用价值最高。从 20 世纪 60 年代末，国内外学者对银杏叶的化学成分和药用价值开展研究，并逐步深入。对银杏叶的研究主要集中在银杏叶提取物的研究。银杏叶提取物对消除自由基、抗肿瘤、抗氧化及保护神经系统有着重要的作用，银杏叶中最主要的活性物质是银杏叶黄酮和银杏内酯类化合物，其中银杏叶黄酮是优良的天然抗氧化剂^[3-4]。利用银杏果叶的有效化学成分和特殊医药保健作用加工生产保健食品、药物和化妆品，正引起国内外研究、开发、生产单位的重视，各国众多企业竞相研制生产以银杏为原料的天然绿色产品，从而为中国的银杏资源的开发利用开辟了无比广阔的前景，提高了银杏的利用价值为社会创造了就业和财富，为人类带来了健康和长寿^[5-6]。

关键词：银杏；黄酮；抗氧化性

前言

银杏(Ginkgo biloba L.)是我国珍贵的经济树种，具果、叶、材等多种用途。银杏黄酮具有抗炎症、抗组胺活性等功能各国相继开发了以EGB为原料的各种制剂达20多种, 年销售额超20亿美元。90年代末，我国用于生产、出口EGB的银杏叶用园、果叶兼用园已达到五万公顷。《美国药典》中规定EGB中银杏黄酮含量不得低于24%，严苛的质量标准制约着我国EGB出口价格，直接影响广大的以种植银杏树和采售银杏叶片为主要收入来源的农民利益。因此，探究影响银杏叶片中黄酮等具有较高经济价值的次生代谢产物合成与积累的主导因子，对叶用银杏原料林栽植产业意义重大。

国内外研究进展

国内研究进展

黄酮类化合物为银杏重要的功能因子，具有较强的清除活性氧自由基、抗脂质氧化的作用，能够调节超氧化物歧化酶、过氧化氢酶，可预防和治疗与活性氧自由基有关的疾病。有许多学者开展了对影响银杏叶黄酮含量因素的研究。杨丽微等^[7]研究银杏落地叶发现不同产地之间，落地叶中异鼠李素类黄酮含量均较低，其他种类黄酮含量高低不同。落地叶中总黄酮的变化趋势与三种黄酮的变化趋势是一样的，均随树龄的增长含量降低，但是在20年时含量反而升高可能是由于随着树龄的增长，黄酮本身降解速率会降低，而由于采样部位不同造成黄酮含量异样情况出现。林琰等^[8]通过对浙江不同时间采收各地区产银杏叶的总黄酮醇苷含量测定发现4月份采收的银杏叶总黄酮醇苷含量最高，但由于4月份刚好是银杏叶的生长期，整体产量比较低，并很容易对银杏后续生长造成影响，不利于来年生长。综合考虑，当以秋季叶尚绿时(8～10月)为适宜采收时间。而曹雨丹^[9]研究了湖州地区春秋两季银杏叶，发现黄酮含量变化幅度较大，春季含量高，较秋季而言，认为春季是采摘银杏叶的最佳时期。程水源等^[10]研究发现黄酮含量与采收季节有关的另一影响因子叶片成熟度也有重要作用。王晓红等^[11]研究发现不同产地和生长年限银杏叶中多糖及黄酮含量存在较大差异，银杏叶的药材质量受自然环境、来源、生长年限等因素影响。徐友等^[12]用T1Q3处理40d后和T2Q2处理20d后，发现单株银杏黄酮含量相较处理前显著增加且大部分处理中，黄酮类化合物的增量存在显著的温度效应，部分处处理中，黄酮类化合物的增量存在显著光强效应和温度、光强交互效应，由此说明黄酮代谢过程基因表达量存在显著或极显著的温度、光强及温度、光强交互效应。刘怀坤等^[13]研究结果表明，不同提取方法和同一方法的不同提取条件对银杏叶总黄酮类化合物的提取效率有显著差异。李思斯^[14]在对银杏外种皮总黄酮的抗氧化活性研究中指出在添加少量提取液时，其抗氧化能力与抗坏血酸同丁化羟基甲苯（BHT）的抗氧化能力能力相当。徐艳等^[15]通过提取银杏叶中活性物质，发现其脂溶性成分对大肠杆菌等均有抑制作用。张静^[16]采用体外 DPPH·和 OH·等自由基清除能力的比较，及黄酮分别在大豆油和鼠脑匀浆体系中抑制脂质氧化的活性比较中发现了银杏黄酮具有较强的抗氧化活性。近几年，我国很多科研单位联合医学高校致力于开发银杏叶片的药用价值，但是由于其成分的复杂性和提取工艺的限制，实现产业化还需要一定的时间。

国外研究进展

60 年代初，有国外学者对从银杏叶中提取出的银杏提取物进行药理及保健功能的研究，并且取得重要进展。Chen等^[17]研究发现青霉纤维素酶是一种具有高转糖基化活性的商业细胞壁降解酶有利于提取银杏叶中黄酮类化合物。Chiu等^[18]实验结果表明，索氏乙醇提取物对总收率、萜内酯和类黄酮含量均有较好的影响。Hasler等^[19]采用反相高效液相色谱法对银杏叶和治疗用提取物中黄酮类化合物进行了定性和定量分离测定。Miao等^[20]研究发现银杏黄酮类化合物的微粉化可以改善药物在体内的吸收，在药物传递系统中具有很大的应用潜力。Vanhaelen等^[21]采用逆流色谱法、梯度洗脱法和制备高效液相色谱法对银杏叶中7种主要的黄酮醇苷进行分离纯化。目前，对银杏及其相关的产品研究较为深入是德国、法国、日本等世界发达国家，涉及领域多为饰品盒保健品等。德国用银杏叶提取物制成的针剂，德国 Schwabe 药厂也生产出多种银杏药制剂^[22]。以银杏叶为原料提取黄酮化合物，可改善心脑血管紊乱等作用。法国天然及合成制药公司 1975 年开发生产出塔那坎^[23]。韩国把含有黄酮化合物的银杏制成制剂，用作医药保健品^[24]。Joanna 等^[25]研究表明，银杏叶提取物还可以作为抗氧化剂添加到肉馅饺子中，不仅没有造成产品感官品质的负面变化，而且减缓脂质过氧化进程。除上述的药用和用作具有保健功能的食品添加剂外，银杏也被开发利用在化妆品行业，因其含有丰富的黄酮化合物，可以有效阻止脂质过氧化，达到抗衰老的目的^[26]。Hertog 等^[27]发现黄酮类化合物能够通过对抗致癌促癌因子达到抗癌作用。

试验材料来源

供试接穗

本试验供试接穗于2018年3月15日在邳州市银杏良种基地采集。选取长势良好的雌、雄银杏各一株，树龄为30年，每株采集1200根接穗，每根接穗保留两个芽孢，接穗封蜡并置于4℃冰箱内储存。

表1 接穗采集样地分布