核输出抑制剂CRM1重要中间体2的合成和表征

摘要：CRM1又叫XPO1，它是一种真核蛋白，调控核蛋白，是核输出蛋白受体importin beta;家族的重要成员，主要负责一些肿瘤抑制蛋白、生长调节蛋白如p53、p21、FOXO、PI3K/AKT、Wnt/beta;-caten-in、AP-1和NF-kappa;B等的核输出，通过小分子化合物来调节XPO1介导的特异性蛋白质的核输出，从而恢复一些重要蛋白质在核内的正常分布及功能，是治疗相关疾病的一种有效方法。因此，CRM1已经成为了抗肿瘤药物研究的靶点之一。目前，大部分报道的CRM1都具有alpha;,beta;不饱和delta;内酯环，包括天然来源的哥纳香甲素、LeptomycinB等化合物。

关键词：CRM1，alpha;,beta; 不饱和delta;内酯环，抗肿瘤

前言

真核细胞被膜系统分割成不同的区间，包括细胞质和细胞核，细胞核含有基因遗传物质，在细胞核内基因表达进而调节细胞的功能，细胞质围绕着细胞核，是转录基因翻译成蛋白质的场所，翻译的集群蛋白质装配成细胞的结构元件，它还是脂肪酸、碳水化合物以及蛋白质代谢的场所^[1]。细胞调节特异性蛋白质的一种方式是通过控制蛋白质在细胞中的分布，因为特异性的功能只能发生在特定的时间和特定的位置，一些蛋白质如肿瘤抑制蛋白及其他的生长调节蛋白在细胞质中被翻译成后，必须运送到细胞核中来发挥它们的功能。相反，特异性蛋白质的异常定位将引发一系列的疾病如各种类型的癌症、免疫性疾病、炎症等。

在早期的癌症治疗中，干扰DNA的复制是最常用的一种治疗方法，然而也产生了许多毒副作用。后来，随着对单一蛋白作用机制认识的深入，从生物化学的角度，科学家推测可能发现了治疗癌症的新方法。在接下来的几年中，特定蛋白抑制剂也被广泛应用于治疗某些特定的癌症，但是耐药性也随即产生。最近细胞多通路作用机理的发现，科学家又重新提出了癌症的靶向治疗，需要结合每一个病人自身的特点^[2]。

最近发现，通过干扰细胞中大分子转运机制能够增加靶向药物的治疗效果可能是正常细胞和癌细胞新陈代谢的不同，而癌细胞中大分子转运的机制更为苛例如核转运机制，实现真核细胞中蛋白和RNA在细胞质与细胞核之间的相互交换。而核转运机制的“桥梁”是核转运蛋白，分为输入蛋白、输出蛋白和双向转运蛋白。其中核输出转运蛋白CRMl转运200多种蛋白(包括大部分肿瘤抑制蛋白），与肿瘤的发生发展密切关系^[3-5]。

1 CRM1介导的核输出机制

细胞核是个相对封闭的环境，大多数蛋白质或RNA在核运输蛋白的协助下才能通过核孔复合体NPC进行核质运输，NPC是细胞中最大的蛋白复合体结构，相对分子质量为125 000，由至少30种不同的核孔蛋白构成，在物理结构上类似于篮球网状结构^[6]。核运输蛋白受体主要是karyopherin-beta;家族的蛋白质，有近19个成员，分为核输出蛋白受体和核输入蛋白受体，每个核运输蛋白受体通过识别特定的序列来识别特定的货物蛋白和RNA，通常这些信号序列被称为核输入信号(nuclear localizationsignal, NLS)^[7]和核输出信号(nuclear export signal NES)^[8]。

XPO1是普遍存在的核运输蛋白受体，它属于核运输蛋白beta;家族的成员，最早在裂殖酵母中发现，它能够特异性的识别富含亮氨酸的NES序列^[9]，目前统计发现含有NES序列的货物蛋白有280多个，已经被收录到NESdb数据库和Valid NES数据库中^[10,11]，NES序列的特点包括：首先它是一段疏水性的序列，能够结合到XPO1疏水性的活性口袋中，其次NES序列是富含亮氨酸的一段序列，是高度保守的一段序列，NES序列由8-15个氨基酸组成，通常被认为是Phi;-X2-3-Phi;-X2-3-Phi;-X-Phi;(其中Phi;代表Leu、Ile、Val、Phe或者Met，X带表任意氨基酸)，NES序列通常存在于很多细胞或病毒的蛋白质中^[12,13]。