CAGCre转基因小鼠的基因型鉴定研究综述

摘要：CAGCre转基因小鼠与杂合子小鼠杂交，筛选后代小鼠得到目的基因敲出的小鼠。利用这种方法可以在小鼠特定组织和特定发育时间通过CAG基因的时空表达控制Cre基因的表达，从而调控Cre-LoxP重组酶系统对靶基因的切除、转入、重组。目前已有很多Cre转基因小鼠构建成功的案例，为CAGCre转基因小鼠的建立提供了技术支持和可能性。本研究是对转基因操作后的小鼠进行PCR鉴定筛选，根据条带结果得到目的CAGCre转基因小鼠，为后续实验提供Cre工具鼠，可用于疾病相关基因研究、疾病模型建立、转基因动物培育等试验研究。

关键词：cre； 小鼠； CAG；基因型鉴定

一、引言

CAGCre小鼠的建立实现了CAG和Cre基因表达的相关性，即CAG的表达决定了Cre酶的表达，而CAG基因是哺乳动物全身性表达基因，通过CAG基因的调控，可以在特定发育时期和身体组织表达Cre重组酶。用于Cre-LoxP重组酶系统对目的基因的切除、转入、重组时，通过CAG基因的表达调控，在特定时间、空间实现靶基因的条件性基因敲除。在进行基因敲除之前，需要准备Cre转基因鼠和LoxP鼠，转基因后的小鼠需要进行筛选得到Cre转基因鼠，为之后的实验提供实验材料。经查阅资料，Cre转基因小鼠的额构建筛选已有较多成功前例，此研究主要对由其他实验室转基因操作后的小鼠进行基因筛选，分选出CAGCre转基因小鼠。

二、Cre-LoxP系统基因敲除和PCR原理及CAG基因概述

1. Cre-LoxP系统原理

Cre-LoxP重组酶系统是一种位点特异性的基因重组技术，广泛应用于DNA链和染色体特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位，在真核生物和原核生物中均有广泛应用。

Cre重组酶是大肠杆菌噬菌体P1中cre基因编码表达的由343个氨基酸组成的相对分子质量38000的蛋白质^[1]。它不仅具有催化活性，而且与限制酶相似，能识别特异的 DNA 序列，即 LoxP 位点，使两个LoxP位点间的基因序列被删除或重组。Cre重组酶有70%的重组效率，不借助任何辅助因子，可作用于多种结构的 DNA 底物，如线形、环状甚至超螺旋 DNA。

LoxP位点长为34bp，包括两个13bp的反向重复序列和一个8bp的间隔区域。其中，反向重复序列是Cre重组酶的特异识别位点，间隔区域决定了LoxP位点的方向。