乌桕SSR标记开发与初步应用

摘 要：【目的】乌桕SSR标记的开发及应用，对乌桕种质资源的综合利用、评价和保护具有重要的意义。本研究通过开发乌桕SSR标记对部分乌桕种质资源进行检测和初步分析，以进一步开展乌桕的遗传多样性及相关遗传研究。【方法】基于现有乌桕转录组数据寻找SSR位点并设计引物，并对乌桕种质资源材料进行PCR扩增及产物检测，借此开发SSR位点标记并进行初步应用。【结果】对乌桕SSR标记体系优化过程进行分析，比较乌桕EST-SSR多态标记开发的效率，评价乌桕种质的遗传多样性。

关键词：乌桕种质资源；SSR标记；遗传多样性

乌桕（Sapium sebiferum Roxb.）为大戟科乌桕属落叶乔木，别名木蜡树、木梓、籽桕、棬子树等。乌桕适应性广，对土壤要求不高，喜光，能耐旱、耐积水，保持水土、涵养水源能力强。既可用来四旁绿化，又可用来植树造林^[1]。乌桕叶色多变，落叶后白色的果实长期不落，形成了极具观赏价值的风景林，又常用于园林景观配置^[2]。乌桕是一种重要的木本油料树种，种仁可榨取梓油，种子混合压榨的油的总出油率可达40%以上，不仅可用作食用油源、工业油源，还可以作为动力油源^[3]。乌桕叶可作药，在农业上可作杀虫剂，杀蚜虫、红蜘蛛、豆芫菁等；作医药可治疗血吸虫病、湿疹、荨麻疹等。

遗传标记是用于标记遗传分析的基因。目前，应用较为广泛的遗传标记主要有形态标记、生化标记、细胞标记和分子标记^[4]。SSR作为第二代DNA分子标记，需要的DNA量少，对DNA质量要求不高，易于PCR检测，适合进行高通量分析。同时具有共显性遗传，多态性高，在基因组中丰富且分布广泛的优点^[5]。SSR标记广泛应用于遗传图谱构建、品种指纹图谱绘制、品种纯度检测及目标性状分子标记筛选等领域^[6]，是研究遗传育种的重要分子标记。

目前关于乌桕的研究主要集中在优良品种选育与栽培技术方面，乌桕的分子标记鲜见报道。本研究旨在利用乌桕转录组测序获得的EST序列，进行乌桕SSR标记的开发，为进一步开展乌桕的遗传多样性及相关遗传研究提供技术支撑。利用乌桕SSR标记对部分乌桕种质资源进行检测和初步分析，对乌桕种质资源的综合利用、评价和保护具有重要意义。

1.乌桕SSR标记开发

1.1传统的SSR标记

SSR位点的传统分离法由 Rassmann 等^[19]于1991年创建, 通过建立基因组文库,利用SSR探针杂交,从中获取SSR位点^[7]。传统基因组SSR标记的开发需要经过构建基因组DNA文库、探针杂交、克隆测序等步骤，虽然方法易掌握，但必须对每个克隆进行筛选鉴定，工作量大，需花费大量人力、财力，而且效率较低。植物中已报道的阳性克隆比率约为2%-3%，成功获得引物的机率则更低^[6]。由于成本因素的限制，长期以来SSR标记仅在模式植物或者是经济价值较高的作物上得到开发和利用^[8]。