开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
抗肿瘤多肽HPRP-A1的靶向性设计及构建
一、研究目的
癌症已成为世界范围内人口死亡的主要原因之一，然而手术和化疗这样的传统治疗策略疗效低、副反应毒性高，因此探索新的癌症治疗药物和策略迫在眉睫。本课题就旨在通过对抗肿瘤多肽HPRP-A1的靶向性设计，使其浓集于肿瘤区域，从而达到特异性杀伤癌细胞的作用。
二、文献综述
抗癌肽(ACP)作为一种新型的抗肿瘤药物，由于其高活性和独特的靶向细胞机制而备受关注。HPRP-A1是一种来自幽门螺旋杆菌核糖体蛋白N端的alpha;-螺旋抗癌肽，由15种具良好抗癌活性的氨基酸组成[1-2]，因为具有抗癌活性区域，HPRP- A1可以破坏细胞膜、诱导细胞凋亡从而杀伤癌细胞[3]。抗癌肽由于其具有广谱的抗癌活性、杀灭癌细胞迅速、不受传统化疗耐药突变的影响、与传统抗肿瘤药物具有良好的协同效应、有一定的选择性以及突出的组织渗透性等特点[4-5],使其具备开发成为高活性、低毒性、高组织渗透性的新一代抗肿瘤药物的潜质,然而,ACP的作用不具有选择性，因此如何进一步提高其针对肿瘤的靶向性仍叩待解决。
细胞穿膜肽（CPPs）是一类可以穿过细胞膜的短肽(一般不超过30个残基)，其毒性低，且通过独立的机制或依赖能量穿过细胞膜，也不需要通过特定的受体来手性识别[6]。CPPs可以共价或非共价键方式连接货物，从而在活细胞内运输多种物质，如纳米粒子肽，多肽，反义寡核苷酸，小干扰RNA，双链DNA和脂质体[7]。然而，细胞穿膜肽的这种穿入作用缺乏选择性，阻碍了它们在体内的应用。为了提高它们的特异性，Jennica L. Zaro等[8]设计了一种高pH敏感性的组氨酸-谷氨酸融合肽(HE-MAP)。在中性pH下,(HE)10中带负电荷的谷氨酸残基可以与MAP中带正电荷的赖氨酸残基相互作用，从而掩盖MAP对细胞的非特异性杀伤作用；在弱酸性pH下，部分组氨酸残基被质子化，破坏了(HE)10与MAP的结合，从而暴露MAP与细胞的结合作用。也就是说，融合肽在pH 6.5或以下时可以有效地传递货物GST给细胞，而在pH 7.0或以上时其传递效率较低。其研究表面了融合肽HE-MAP在靶向酸性肿瘤微环境[9-10]的诊断和治疗方面的潜力。
基于此设计出一种pH敏感性重组多肽（HE-MAP）[11]，该多肽由3部分组成，即(1)含有10个组氨酸-谷氨酸重复序列的肽链（(HE)10），(2) 由5个甘氨酸残基组成的柔性肽链（G5），和(3) CPP（MAP）。其中，HE为pH敏感基团，E为带负电的谷氨酸，H在生理pH条件下不带电，在弱酸性pH条件下带正点；MAP为含有5个赖氨酸残基的两亲性CPP，二级结构为alpha-helix，而5个赖氨酸残基均位于其空间结构的同一侧面；G5为柔性连接将HE与MAP相连，使(HE)10和MAP能够通过静电作用相互吸附。同时，MAP为富赖氨酸的两亲性细胞穿膜肽,与两亲性细胞穿膜肽相比，阳离子细胞穿膜肽，尤其是富精氨酸阳离子细胞穿膜肽的研究和应用更为广泛[12-16]。
三、研究内容
本课题拟以寡聚精氨酸为细胞穿膜肽，通过HE修饰使其具有酸敏性，同时，以HPRP-A1 (Ac-FKKLKKLFSKLWNWK-amide)为抗肿瘤多肽，构建HPRP-A1-HE-CPP融合蛋白，该重组蛋白可以表现出高度的pH敏感性，即pH 7.4时，MAP所带正电被HE中和而表现为非激活状态，HPRP-HE-MAP的细胞摄取和膜结合能力均处于较低水平；pH 6.8时，H被质子化干扰HE与MAP静电结合的稳定性导致HE与MAP分离使MAP恢复激活状态，HPRP-HE-MAP的细胞摄取和膜结合能力均处于较高水平。利用HE-CPPs来修饰HPRP-A1，以减少正常组织细胞对HPRP-A1的摄取，使其特异性浓集于肿瘤区域，从而实现HPRP-A1对肿瘤的靶向作用。
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