开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 拟研究或待解决的问题
干扰素alpha;(Interferon-alpha;)具有广泛的抗病毒、抗增殖和调节免疫机能等生物学活性。在临床上广泛用于治疗各种病毒性疾病和多种恶性肿瘤。但是天然干扰素在体内有亲和力低,半衰期短等缺点。在临床上常规给药方式为肌注或皮下注射,因为需要频繁给药,这无疑就给患者带来很大的不便。Eyal Kalie等通过噬菌体展示技术,筛选得到了YNS突变体,其与IFNAR的亲和力大大提高。本课题旨在在大肠杆菌中表达重组干扰素alpha;突变体,以便将来研究其活性。
- 采用的研究手段(实验方法)
1.对IFN-alpha;基因进行定点突变。
2.用primer premier 5.0设计IFN-alpha;基因的引物。
3.用PCR技术对IFN-alpha;基因进行扩增。
3.1 设置PCR的参数如下:高温变性(98度10秒);低温退火(59度5秒);适温延长(72度5秒)。
3.2 设置30个循环,启动。
3.3 将得到的目的基因于1%的琼脂糖凝胶中进行电泳。
3.4 按DNA回收试剂盒回收目的基因。
4.从大肠杆菌中提取质粒
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