选题背景
在表达重组蛋白系统中，大肠杆菌被广泛用作受体菌，当前大多基因工程产品是通过大肠杆菌表达的，其优点是工艺简单，产量高，周期短，生产成本低，表达外源基因产物的水平远高于其他基因工程表达系统。目前遇到的问题是在SDS-PAGE电泳时目的条带不明显，背景杂带多，影响产量。由于背景杂带是大肠杆菌自身基因表达的蛋白，且数量较多，现在应该逐个敲除靶点基因，且敲除的靶点基因不能影响菌株生长和表达重组蛋白的能力。因为E．coli BL21( DE3) 是最为常用的宿主菌，因其为其他菌株一般为此菌株的衍生菌株，故对其进行相关的基因组改造很有价值。
研究的主要内容
大肠杆菌表达菌株BL21( DE3)的基因组改造，敲除靶点基因，减少电泳杂带。
研究的思路及方法
选用菌株 选取ｐＥＴ系统常用的表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。
选用培养基 培养基的选择对可溶性外源蛋白的表达有显著影响。一般选用ＬＢ培养基即可。
所需质粒 ＰＫＤ４、ｐｃｐ２０、ＰＫＤ２０。
感受态细胞 ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ
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