开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题研究背景和拟解决的问题
本课题组前期在对肝素酶Ⅲ结构信息分析的基础上，将其活性中心位点附近氨基酸突变为半胱氨酸后，通过对硫酸软骨素、透明质酸、海藻酸钠等多糖进行底物特异性研究筛选突变体，筛选得到了既能水解硫酸乙酰肝素（alpha;-1,4）又随机具有裂解透明质酸（beta;-1,4）能力的双功能酶突变体K102C。本课题将在此基础上，鉴定K102C水解新底物透明质酸的产物，初步分析该酶底物选择性与酶结构的关系，从而揭示肝素酶的分子进化机制。
二、采用的研究手段
1. 透明质酸裂解产物鉴定
反应混合物（400ml 1mg/ml透明质酸溶液，575ml 50mM Tris-HCl，25ml酶溶液）在37℃反应过夜，煮沸10分钟终止反应，12000 r/min离心去除酶，10 kDa浓缩产物溶液并冻干。紫外光谱扫描、红外光谱(IR)、DNS法和液质联用法确定K102C催化透明质酸降解产物。
1.1紫外光谱扫描
紫外可见分光光度计在190nm到300nm范围内检测不饱和低聚物，肝素水解产物做对照。
1.2傅里叶变换红外光谱学方法
取100 – 200mg溴化钾(KBr)粉末与产物混合5-15min，傅里叶变换红外(ir)光谱仪测量，标准肝素、透明质酸作为对照。傅立叶变换红外光谱检测范围为400- 4000cm-1。
剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
