包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）【拟研究或解决的问题】1.构建膜联蛋白1（ANXA1）工程菌及质粒。
2.成功表达膜联蛋白1并纯化，检测蛋白质量。
【采用的研究手段】1.课题背景介绍在磷脂结合蛋白超家族中，有一类钙依赖的蛋白称为膜联蛋白 (Annexins)，其中，膜联蛋白1（ANXA1）是该家族第一个被发现的成员，研究发现其普遍存在于除细菌外的动物、植物及菌类多种生物体内，虽然血液中并未发现膜联蛋白1，但几乎所有器官中其均有表达，在许多组织和细胞中可以检测得到。
现有大量研究表明膜联蛋白1参与抗炎症反应、细胞分化和增殖、细胞死亡信号调控、凋亡细胞吞噬清除等许多细胞生命活动。
近来一些报告表明，膜联蛋白1（ANXA1）可能在肿瘤的发生和发展有重要的调控作用，对肿瘤的诊断和治疗有不可低估的意义。
2课题研究的目的和意义：膜联蛋白1（ANXA1）的特性及参与的生物学功能研究较为深入，但在临床治疗及疾病诊断方面的了解尚不深入，用于治疗疾病的临床研究鲜见。
课题研究通过分子克隆手段将目的基因膜联蛋白1扩增，构建出基因工程菌及质粒，将测序成功的质粒通过蛋白表达系统诱导表达出目的蛋白，经过纯化并检测蛋白质量，进而可以生产有价值的蛋白质产品，以便用于后续实验，如抗体库的构建，特异性抗体筛选，免疫动物实验，乃至制成药物后的临床实验等。
3.研究内容：3.1实验步骤（1）根据已知目标基因的全长序列,利用引物设计软件设计特定引物，交由相关公司合成；（2）稀释合成的引物，用PCR技术扩增基因片段，琼脂糖电泳检测PCR是否成功；（3）PCR产物进行纯化；（4）选择合适的限制酶，将纯化产物进行双酶切，再次进行纯化；（5）酶切产物与合适的酶切后载体进行过夜连接；（6）制备感受态细胞，与连接产物进行转化，涂平板过夜培养；（7）将转化成功的长菌平板，挑单克隆摇菌；（8）菌液提取质粒，进行双酶切，琼脂糖凝胶电泳验证质粒的构建情况，构建成功将质粒送去相关公司测序，测序成功后，菌液加甘油放冰箱保存；（9）将测序正确后的质粒与Transetta转化，平板长菌后，挑取单克隆，加入诱导剂IPTG做小诱，进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，探索蛋白诱导的最佳条件；（10）进行扩大培养，再次用IPTG诱导过夜，收集菌液；（11）对菌液进行裂解，用超声仪进行超声，离心等纯化步骤；（12）加入beads孵育，用洗脱液洗脱，进行透析过夜；（13）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白表达情况；（14）测浓度，检测所纯化蛋白的质量。
3.2研究难点及要点1.引物设计：设计引物要遵循引物的设计原则，找到DNA序列的保守区，同时应避免扩增模板的二级结构，引物的设计会对实验结果有着重要的影响。
2.选择合适的限制酶：尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各种酶在公用BUFFER里的效率。
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