开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、课题的研究背景、意义和目的
表皮生长因子受体-2（HER-2）受体是一种在胚胎发育时期就存在的肿瘤相关抗原，在肿瘤细胞上过度表达。数据显示，其与肿瘤细胞的迁移能力，癌症复发风险和不良预后有关。同时，HER-2在肿瘤细胞表面过度表达，会产生对抗癌症免疫治疗极好的靶向作用。因此，针对HER-2的单克隆抗体与络氨酸激酶抑制剂研究领域逐渐兴起，并有相关产品上市，如单克隆抗体曲妥单抗，并已证实其对癌症被动免疫治疗的作用。但是，由于曲妥单抗主要针对HER-2膜外结构，具有治疗局限性，且带有一定心脏毒性，对使用氨茴环霉素的患者限制使用。
为了解决曲拓单抗的局限性，研究抗HER-2疫苗成为新的思路。研究显示，在携带HER-2高表达肿瘤的患者体内存在对HER-2的细胞免疫与体液免疫，并可以在疾病早期，延缓肿瘤的生长。并且，患者使用疫苗激发或诱导已存在的抗HER-2免疫反应具有多个优势：1.更少的注射次数2.更大的使用范围3.证明记忆免疫反应可阻止疾病复发。但是，免疫系统对于自体物质的免疫耐受阻碍了针对多种癌症和慢性疾病的治疗性疫苗的开发。如何突破免疫耐受，诱导免疫系统产生针对HER-2的抗体，是疫苗设计与开发中亟待解决的问题。
1999年Boaz将邻硝基对叠氮苯作为锚定结构引入肿瘤相关抗原多肽后，可有效促进抗原多肽与MHC-Ⅰ类分子的结合，稳定MHC-多肽复合物的形成，引起细胞毒性T细胞免疫反应。Berd等人以二硝基氟苯与自体癌瘤结合产生的二硝基酚修饰的自体癌瘤，作为自体疫苗治疗癌症疗效显著。Lani等人进一步用化学合成的方法将抗原表位肽中的酪氨酸置换成硝基酪氨酸，证实了仅在一个位点引入免疫原性氨基酸即可明显影响MHC I 类限制性抗原表位的识别。上述研究结果提示我们：在蛋白质中引入具有免疫原性氨基酸可能是一种有效的突破自身免疫耐受，开发自体蛋白疫苗的新方法。
本实验室前期已构建含对硝基苯丙氨酸的突变体，本课题将构建好的含对硝基苯丙氨酸的突变体进行表达和分离纯化，并运用肽指纹图谱对非天然氨基酸的引入进行鉴定,最后，通过动物实验评价突变体的免疫原性，为研制和开发基于HER2的肿瘤疫苗提供理论基础和实验依据。
- 课题研究的主要内容
1.含对硝基苯丙氨酸的Her2蛋白疫苗的表达与纯化
1.1运用LB培养基和M9培养基对野生型和突变体蛋白进行表达。
1.2通过SDS-PAGE对非天然氨基酸引入的正交性进行鉴定。
1.3通过包涵体的变性、复性及亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化。
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