脑血管疾病标志物的均相化学发光免疫分析方法文献综述

 2022-12-24 15:54:57

课题简介:

合成无定形碳(ACNPs)、设计与制备DNA信号探针,考察其在脑血管疾病标志物的均相化学发光免疫分析方法中的应用。该方法可直接检测血清中的疾病标志物和间接评估相关药物药效。

前言:

伴随着我国人民生活水平的不断提高,不可避免地出现了许多具有高发病率的疾病,其中尤为普遍的是心脑血管疾病。心脑血管疾病占我国慢病死因的51%,严重影响中老年人健康[1]

在脑血管疾病的诊断过程中,血清标志物C反应蛋白(CRP)具有一定的参考价值,可提示机体损伤严重程度,为治疗提供可靠依据[2],故本研究以CRP作为对象进行定量检测。

化学免疫发光分析,是一种利用化学发光系统作为免疫反应的指示系统,借以定量检测抗原或抗体的方法,它是化学发光法和免疫分析法结合的产物,同时具有化学发光的高灵敏度和免疫分析法的高特异性。发光物质可直接作为抗原或抗体的标记物,也可以以游离形式用于催化剂和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。化学发光免疫分析方法已经被有效的建立用于复杂样品中低浓度分析物的定量分析,其优点是高灵敏度、高选择性、低成本和无污染,但也存在着步骤繁琐、通量受限等不足。

近年来,邻位诱导效应作为一种简单快捷的蛋白分析方法应运而生,这是一种利用DNA辅助蛋白检测的策略,其基本分析原理为:用两个或多个连有单链DNA的亲和配体检测目标蛋白分子,当没有目标蛋白存在时,两个或多个单链DNA不得靠近,从而无后续反应进行,只有当这些亲和配体同时识别和结合到同一目标蛋白上时,亲和配体连接的单链核苷酸才会充分接近,继而进行后续反应。

Zong等[3]将邻位诱导效应引入化学发光免疫分析,将对大蛋白的化学发光检测转化为对DNA的检测,核心思想是设计特殊的DNA发卡结构信标,一端是发光基团Cy5,另一端是猝灭剂BHQ2,当体系内存在目标抗原时,免疫复合物将抗体所携带的DNA拉近,从而打开DNA发卡结构,使两端的Cy5和BHQ2可以远离,化学发光检测信号可以恢复。

本项目拟将该策略应用于对脑血管标志物CRP的检测,并在参考文献的基础上选用新型的猝灭剂来提高效率和灵敏度。无定形碳(ACNPs)作为化学发光能量转移(CRET)免疫传感平台的新型能量受体,转移效率高于氧化石墨烯等猝灭剂,具有合成简单、生物相容性好和水溶性好等优点,可作为一种优良的猝灭剂被用来制备分子信标。

实验内容:

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