生脉散有效组分GRS对小胶质细胞极化的作用研究文献综述

 2022-12-12 19:47:15

拟研究或解决的问题:

本课题拟考察生脉散有效组分GRS能否有效抑制OGD诱导的小胶质细胞的极化,并初步探讨可能的作用机制,为生脉散防治中风提供一定的实验参考依据。

采用的研究手段:

(1)BV2细胞复苏传代培养

将液氮中存放的BV2细胞融化,1000rpm,离心5min,将冻存管中上清液倒掉,加入培养基,轻轻吹打,再将细胞悬液转移至培养瓶中,加入充足的培养基,吹打均匀,孵箱培养。传代时,用PBS清洗,加入消化液,显微镜下观察,发现细胞质回缩,细胞间隙变大,终止消化。重新加入培养基,吹打均匀,吸取合适数量的细胞悬液,至新培养瓶中,再补足培养基。

(2)OGD诱导小胶质细胞极化

取BV2细胞,替换培养液,更换为DMEM 无糖培养基,在37℃培养箱孵育1h。再将细胞置于厌氧培养箱内,通入5% CO2、10% H2 和85% N2,使箱内氧浓度<1%。,孵育4 h。

(3)Western法测定INOS, arg-1的表达

等量加入细胞裂解液后,提取BV2细胞的蛋白,4℃裂解20 min。离心去上清液。用BCA蛋白试剂盒测定蛋白质的含量。之后剩余的裂解液按1/5的体积加入loading buffer煮蛋白。再用10% SDS–PAGE分离样品蛋白并转移到PVDF膜,膜由3%牛血清白蛋白(BSA)封闭后孵一抗。然后由兔抗结合辣根过氧化物酶作为二抗孵育2 h。免疫反应带由化学发光系统(ECLplus, Amersham)检测。

(5)免疫荧光法观察INOS,arg-1的表达

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