课题的目的：反相高效液相法测定来曲唑的含量。
研究内容：建立一种反相高效液相法用于测定斑马鱼暴露溶液中来曲唑的含量，并对该方法进行系统的方法学验证。
进度安排：
- 调研文献，总结来曲唑含量测定方法
- 反相高效液相测定条件的优化；
- 反相高效液相法测定来曲唑含量方法学验证；
- 使用该方法用于监测斑马鱼毒性暴露试验溶液中来曲唑的含量。
课题依据：
来曲唑作为高选择性非甾体类芳香化每抑制剂，在临床中的应用也日益增多，全球生产量也日益增大，导致了在环境中的排污量也逐年增加[1]。来曲唑性质稳定，能够在环境中长期存在而不被降解，所以会对水体生物产生长期的影响，但国内外对该部分的研究基本处于空白期，并未见报道来曲唑排污对于水生生物的毒性现象。本文针对以上考虑，希望通过研究来曲唑对于斑马鱼的毒性影响来评价水环境中来曲唑排污对于水体环境的影响。在研究来曲唑对于斑马鱼的毒性影响之前，如何有效的监测斑马鱼暴露溶液环境中来曲唑的浓度，将是上述试验的基础。本课题就是基于此需求，通过调研文献，希望能够建立一种快速、有效的来曲唑检测方法。
在美国药典（USP）27 版中，来曲唑含量和有关物质测定均采用高效液相色谱法（HPLC）梯度洗脱法[2]。但在国内，来曲唑含量测定采用容量滴定法，而有关物质测定采用HPLC 法。本课题组旨在建立一个方法通过高效液相色谱法测定原料药中来曲唑的含量，并进行系统的方法学验证。
研究手段：
可供含量测定的分析方法主要包括容量分析法、光谱分析法和色谱分析法。其中容量分析法操作简便、结果准确、方法耐用性高，但方法缺乏专属性，主要适用于对结果的准确度与精密度要求较高的样品测定；光谱分析法简便快速，灵敏度高，并具有一定的准确度，但方法专属性稍差，主要适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目；色谱分析法则具有高灵敏度与高专属性、并具有一定的准确度，但其结果计算需要对照品，本法主要适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。本实验选择反相高效液相色谱法（RP-HPLC）进行含量测定。
含量测定：色谱条件：色谱柱：C18（ZORBAX Eclipse XDB-C18 150times;4.6mm, 5 micro;m）；流动相：乙腈∶水=40 ∶ 60 ；检测波长：230 nm ；流速：1.0 mL/min ；进样量：20 micro;L ；稀释剂：流动相[3]。
方法学验证：准确度、精密度（重复性、重现性和中间精密度）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。而在含量测定中需要验证的内容为：准确度、精密度、专属性、线性、范围和耐用性。
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