四川产对叶百部的生物碱成分研究文献综述

 2022-12-03 19:19:23

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

  1. 研究背景

中药材百部是被子植物门的一种多基源中草药,其以植物块根入药,性微温,味甘苦,内服可以润肺下气止咳,外用具有杀虫灭虱之效[1]。作为我国的传统中药,百部有悠久的药用历史,最早见于汉末陶弘景所引的《名医别录》:“主咳嗽上气[2]。”而后《博物志》云“治暴嗽甚良[3]。”《本草纲目》谓“皆治肺病杀虫[4]。”等,此均可考鉴百部的灭虫止咳疗效。值得一提的是,经考证古代百部来源包括天门冬属植物羊齿天门冬,但现代研究表明同以块根入药的羊齿天门冬虽也具有止咳止痒的作用,其成分却与百部属来源的中药材百部有较大差异[5,6]。因此羊齿天门冬未能作为现代中药材百部的来源之一,百部化学成分的现代研究也以2020版《中国药典》所收录的对叶百部 (Stemona tuberosa)、蔓生百部(Stemona japonica)、直立百部 (Stemona sessilifolia)为准[1]

百部属植物的脂溶性成分是生物碱,也是中药百部的主要活性成分[7,8]。其研究始于日本。1895年,日本学者长景长义从蔓生百部根中分离得到生物碱Hodorine;而后百部碱、百部次碱、异百部次碱等百部生物碱相继被发现。三十年代初,德国Schild,H.等通过霍夫曼降解、溴化、还原等化学反应初步确定对页百部碱的官能团;随着UV、IR、NMR等波普技术的出现,1961年加拿大Gouml;tz, M.和Boyri, T.等确定其平面结构,1967年Edwards,O.通过X-射线衍射法确定其立体结构,自此百部生物碱的提取分离及结构鉴定工作取得了阶段性成果[9]

在百部化学成分日渐明了的同时,生物碱独特结构为百部带来的医疗作用也鼓舞了众多科学家的研究热情。基于古籍记载的杀虫止咳作用,Shinozaki H.等诸多学者通过小龙虾的神经肌肉实验、甲状腺髓样癌细胞抑制实验、豚鼠咳嗽模型等确定了对叶百部碱(Tuberostemonine)、新百部宁(Neostenine)、新对叶百部碱(Neotuberostemonine)等百部生物碱有显著的神经肌肉传导作用、抗肿瘤作用、镇咳平喘作用[10,11,12]。Brigitte B等[13]发现对叶百部碱对海灰翅夜蛾幼虫有较强的拒食活性,从而抑制幼虫生长而达到杀虫效果。除此之外,抗菌、祛痰、镇静、镇痛[14]等作用也在各研究报道中多有提及。

由于入药价值高、杀虫效果显著,中药材百部在生活中的应用越来越广泛。但植物块根中的生物碱含量极其有限且易变质,日渐枯竭的野生百部资源无法满足日益增长的野生百部需求[15,16]。因此,关于百部栽培、提取分离的工艺化生产的研究也越来越重要,中药材百部仍然具有极大的开发潜力。

  1. 研究目的及意义

对叶百部[Stemona tuberosa Lour.]块根呈长圆状纺锤型,茎攀援状,少数有分支,叶纸质或薄革质,呈卵状,先端较尖,边缘波状且多对生或轮生,在我国长江以南以及中南半岛、菲律宾等多个亚洲国家均有分布[17]。它作为中药百部的来源之一,生物碱含量可达0.53-3.1%[18],药用价值极高。根据近些年对百部的药理学研究,百部中还含有抗氧化、抗肿瘤的物质,如百部根提取物及其单体具有显著的逆转P-gp介导的肿瘤多药耐药(MDR)活性作用,其对治疗肿瘤的多药耐药可能具有重大意义。为进一步研究百部化学成分,并通过药理活性筛选、探寻其活性成分,为百部类药材资源的开发利用和质量控制提供理论依据,本课题拟以四川达州产对叶百部为研究对象,采用酸提碱沉法、阳离子树脂交换法、硅胶柱层析法、高效液相色谱法等方法提取分离对叶百部生物碱,并通过核磁共振波谱法、质谱法鉴定纯化生物碱的化学结构。

  1. 实验方案
  2. 现有提取分离方法简介

1.1提取方法

植物总生物碱提取方法大致有三类:水提法、醇提法、亲脂性有机溶剂回流法。具有一定碱性的生物碱在植物体内多以盐的形式存在,故可选用酸水将其置换为生物碱盐以增大溶解度。但此方法所得提取液体积大,难浓缩,且多水溶性杂质,因此水提生物碱通常采用阳离子树脂交换法或有机溶剂萃取法纯化和富集生物碱。醇提法可适用于不同碱性的游离生物碱及其盐。但此法脂溶性杂质较多,通常需要配合酸水-碱化-萃取法处理除杂。亲脂性有机溶剂提取法则多适用于游离型生物碱,提取前以少量碱水浸泡药材使生物碱游离,采用浸渍、回流或连续回流法提取脂溶性生物碱。

以往百部生物碱提取研究中,多采用超声提取法、浸渍法或回流提取法[19,20,21,22]。研究表明,百部类生物碱不稳定,尤其在碱性条件下更易变化,对光、热也敏感[18]。因此本实验中以超声醇提法为主提取总生物碱,水提法、回流法为辅进行纯化、富集。

1.2分离方法

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