一、 拟研究或解决的问题口腔鳞癌的发生是一个从口腔癌前病变、轻度异常增生、中度异常增生、重度异常增生到原位癌和浸润癌发展的渐进过程,早期正确识别具有恶变潜能的口腔疾病,正确诊断、持续监测和及时干预,对于阻断甚至逆转其癌变具有重要意义。
黏液素样细胞表面黏附分子 CD24 在包括口腔鳞癌在内的多种恶性肿瘤中表达上调,具有独立评估多种恶性肿瘤预后的特点,是一个潜在的肿瘤干细胞表面标记物,也是一个靶向肿瘤干细胞的重要靶点。
2013 年,Abdulmajeed [1]等报道了CD24在口腔上皮异常增生和鳞癌组织中的表达,发现CD24 在鳞癌组织中表达显著增高,免疫染色评分虽然不能区分口腔上皮异常增生的分级,但却能够有效地区分上皮异常增生和鳞癌组织,是一个潜在的基于口腔鳞癌肿瘤干细胞的治疗靶点。
本研究拟探究如何让CD24在人口腔鳞癌中高效表达,使其作为一种细胞表面的抗原,被用于之后的药物检测,以及作为相应抗体筛选的一种靶细胞。
二、 研究手段及方法构建CD24过表达载体,将重组质粒转化到E.coli DH5alpha;感受态细胞中,使得目的质粒在感受态细胞中大量扩增,提取重组质粒,随后之后包装慢病毒,通过慢病毒转染的方式感染SCC-4口腔鳞癌细胞,通过抗生物筛选的方法,得到阳性克隆的细胞。
并通过测序证明序列正确,包装慢病毒达到足够的浓度,且过表达细胞阳性率达到85%以上。
三、 文献综述CD24是一种小分子量高度糖基化的黏附分子,由27个氨基酸组成,相对分子质量约为38 000~70 000,通过糖基磷脂酰肌醇 ( glycosyl phosphatidyl inositol,GPI) 黏附在细胞膜上[2]。
最早在Wang W等人的研究中,CD24被认为是 B 细胞的标记物,在 B 细胞分化早期阶段表达,同时 CD24 还可对淋巴细胞成熟、神经系统发育以及生理状态下的组织更新有非常重要的作用[3]。
CD24 主要表达于造血系统的细胞(如B细胞前体及中性粒细胞)、神经系统组织以及一些特定的上皮细胞( 如角质化细胞及肾小管上皮细胞)[4],同时也可见于大多实体肿瘤[5]、炎症组织[6]以及自身免疫性疾病的某些细胞[7]。
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