金银花的分子鉴定
开题报告
一：论文研究的意义、目的
金银花为忍冬科植物，忍冬干躁花蕾或带初开的花，为常用中药。具有清热解毒，凉散风热之功效，主治痈肿、喉痹、丹毒、热毒血痢、风热感冒、温病发热等症，应用史悠久。2010 年版《中国药典》记载金银花来源为忍冬科植物忍冬，山银花来源为忍冬科植物灰毡毛忍冬、红腺忍冬、华南忍冬和黄褐毛忍冬。金银花与山银花在植物形态和药材性状上非常相似，很难区分，民间混用情况非常普遍，同时由于金银花和山银花价格相差大，很多不良商贩用山银花冒充金银花，但二者的药效和药性却存在明显差别。因此，建立金银花质量标准体系、快速有效鉴定金银花与山银花药材的方法非常有必要。[1~2]
常规的性状和显微方法鉴别金银花和山银花时，虽具有方便、简单、有效等优点，但仍有一定局限性，而分子标记方法有稳定、不受器官和环境因素影响的特点，适合用于物种的真伪鉴定。本研究利用DNA 分子鉴别技术进行金银花的真伪鉴别，通过此项课题来进一步探究金银花真伪鉴别方法，找寻更加便捷有效的方法，优化方案。
二：基本内容
本实验主要是通过CTAB法对金银花和山银花DNA的提取，通过基于双向位点特异性PCR的方法来鉴别出真品和伪品。为金银花真实性鉴别提供了简单快捷的方法。
取金银花山银花叶DNA 进行双向等位基因特异性 PCR，PCR 反应体系为 2.5 mu;L 10 Ex Taq buffer，2 mu;L 10 mmolL － 1 dNTPs，引物 Lj-1F，lj-2R 各 0.08 pmol，引物 Lj-1R，lj-2F 各 0.2 pmol，0. 5 U Ex Taq 酶，约10 ng DNA 模板。反应在Eppendorf 公司的Mas tercycler 型 PCR 扩增仪上进行。反应结束后在 PCR 反应体系内加入5 mu;L 6 loading buffer，混匀后于 EB 染色的 1% 浓度琼脂糖凝胶电泳检测，SYNGENE 凝胶成像系统观察、成像。[3]讨论此方法的优化方案，探讨出怎样简单快捷又准确的鉴别出金银花的真品伪品方法。
三：国内外研究的历史和现状
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