开题报告内容：
一、 拟研究或解决的问题
细胞外基质（Extracellular matrix，ECM）是由大分子构成的错综复杂的网络，为细胞的生存及发挥生理功能提供场所，并通过信号转导通路影响细胞的形状、代谢、功能、迁移、增值和分化。ECM因在生理学调控中起了重要作用，引起了科学家们的注意。根据目前国内外文献中报道的细胞质分子的组成和作用，我们推测其中的蛋白质组分仍有很多未发现的翻译后修饰位点。目前已知的生物体内的蛋白质翻译后修饰多达300多种，并在细胞周期调控、信号传导及免疫应答等众多生命活动中发挥着关键作用，因此发现新的蛋白质翻译后修饰类型具有重要的意义。本课题拟利用蛋白质组学的方法寻找新的蛋白质修饰位点并通过质谱鉴定，明确修饰部位和区域，并对不同生理状态下翻译后修饰的变化情况进行定量分析，开启新的信号通路或者完善已有的信号网络，从而为后续的研究提供理论支持。
二、 采用的研究手段
将293T细胞进行无菌贴壁培养，选择生长状态良好的细胞置于制备好的基质分子沉积的表面继续生长，随着细胞的生长，细胞外基质分子逐渐沉积，然后采用酸碱处理法、高低渗处理法、离子/非离子及两性离子去污剂法、酒精处理法和生物脱细胞法等多种方法除去细胞以及细胞裂解产生的碎片，从而得到目的分子。通过对不同的洗脱条件进行考察，将ECM分子从沉积表面洗脱下来。利用SDS-PAGE技术对蛋白分子进行初步考察，在SDS-PAGE的凝胶内获得目的蛋白，将其切割下来，通过溶解凝胶释放蛋白，再用蛋白酶水解为多肽，此时的多肽为混合物，利用液相色谱分级分离，进入质谱仪进行进一步鉴定和定量分析。
实验整体技术路线如下图所示
Fig.1 技术路线图
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