背景介绍:
和厚朴酚为中药厚朴中的主要活性成分之一,具有明显的,持久的中枢性肌肉松弛、中枢神经抑制作用,抗炎,抗菌,抗病原微生物,抗溃疡,抗氧化,抗肿瘤,抑制吗啡戒断反应,可抑制血小板聚集等药理作用。钠离子通道在大多数兴奋细胞动作电位的起始阶段起重要作用,参与动作电位的形成和兴奋性传导。TTX敏感性(TTX-S) 钠电流在神经兴奋传导中起着重要作用。本课题在急性分离的小鼠背根神经节上,应用膜片钳技术,观察和厚朴酚对TTX-S钠电流的作用,从而研究其神经细胞的作用机制。
研究意义:
背根神经节(DRG)来源于神经嵴的脊神经节内的感觉神经母细胞发出轴突,呈束状,左右对称地从神经管的背部进入。DRG细胞是一类具有假单极结构特征的初级感觉神经元,外周感觉信息起始于它的外周末梢并从外周向中枢传导至脊髓背角,借中枢末梢释放的神经递质作用于突触后靶细胞,对感觉信息进行初步加工,完成初级感觉信息的传递。
钠通道的功能主要是维持细胞的兴奋性及其兴奋的传导,普遍存在于各类生物的细胞膜上。钠通道蛋白是由alpha;-亚基和beta;亚基组成的一种跨膜蛋白,其中alpha;-亚基是功能性单位,beta;亚基主要起辅助性作用。根据对河豚毒素(TTX)敏感性的不同,细胞上的钠通道分为两种:TTX不敏感型(TTX-R)和TTX敏感型(TTX-S)。
TTX-R钠通道电流主要由2种亚型Nav1.8和Nav1.9介导,研究表明,TTX-S钠通道在中枢神经和外周神经系统中发挥重要作用。参与脑缺血,癫痫,疼痛等多种疾病的发生。因此,钠通道阻断剂临床上可用于治疗脑缺血,抗癫痫,麻醉,镇痛等。研究发现和厚朴酚具有持久的中枢抑制和中枢镇静作用,其作用的机制并不十分清楚,为了探讨其可能的作用机制,我们观察和厚朴酚对TTX-R钠通道电流作用。
本实验通过急性分离小鼠背根神经节细胞,采用膜片钳技术记录小鼠DRG细胞TTX-R细胞钠通道电流,观察和厚朴酚对TTX-R钠电流的影响,研究和厚朴酚对神经抑制作用的可能机制。
研究内容及方法:
分离小鼠的单个DRG细胞,进行全细胞膜片钳记录,记录TTX-R钠电流,给予厚朴酚后,观察厚朴酚对TTX-R钠电流及其通道动力学的影响。
1、单个DRG细胞的分离。
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