一、毕业设计研究的内容和意义1.熟悉心肌缺血再灌注损伤的机制和研究进展。
2.学习并熟练掌握豚鼠离体心肌缺血再灌注模型的造模手法、TTC染色技术、数据处理及柱状图制作技术以及熟练使用BL-420生理记录仪。
3.根据新药临床前研究指导原则的要求,研究DL-4对豚鼠离体心肌缺血再灌注损伤的治疗作用,为临床应用提供实验依据。
二、研究方法(研究手段)1.建立豚鼠离体心肌缺血再灌注损伤模型并分组取清洁级豚鼠30只(体重180-200g,雌雄各半),随机分为5组,每组6只。
设模型组、DL-4低浓度组(10-6M)、DL-4中浓度组(10-5M)、DL-4高浓度组(10-4M)、阳性对照药奥扎格雷组(10-5M),用于检测DL-4对豚鼠离体心脏梗死率和血流动力学指标的影响。
豚鼠击晕后迅速取出心脏,放在0-4℃的氧饱和洛氏液中,进行主动脉插管,固定后连接Langendorff装置,经主动脉逆行插入灌注管,置于主动脉瓣上方约1cm处。
用通有氧气的K-H液灌流,灌流温度37.00.5℃,高度60-80cm,稳定20min后,停灌30min,恢复灌流60min,模型组豚鼠离体心脏不停灌流。
除模型组外的其他各组复灌同时用恒流泵持续给对应剂量的药物60min(1mL/min)。
2.测定不同浓度梯度的DL-4对豚鼠离体心脏梗死率的影响复灌60min后取下心脏,剪去心房及心底部血管,称量心室重量,将心室沿心室沟平均切成5片放入1% TTC溶液内,在37℃恒温水浴染色5min,取出后首先拍摄数码照片,而后分离未染色部分(即梗塞部分)并称重。
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