1课题研究的目的与意义由于rHDL具有内源性、结构两亲性及肿瘤细胞靶向性等多种优良特性， 其越来越多的被用做靶向输送抗肿瘤药物的载体，本课题基于rHDL的优良特性及其在抗肿瘤当面广阔的应用前景，以组分IV为原料，通过优化分离与纯化工艺，旨在获得纯度高、活性好的载脂蛋白，从而为rHDL的制备蛋白材料。
2国内外研究的发展概况和趋势（1）目前国内外载酯蛋白提取方法主要有：密度梯度离心法、等电点沉淀法、盐析法、有机溶剂沉淀法等（2）蛋白纯化方法有：葡聚糖凝胶层析法、DEAE-Sepharose FF层析法等。
二主要研究内容本实验采用有机溶剂沉淀法结合等电点沉淀法分离蛋白，后通过葡聚糖凝胶层析法进一步纯化载脂蛋白，并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等手段验证分离纯化后蛋白的纯度。
因此本课题主要研究内容如下：1 优化有机溶剂沉淀法结合等电点沉淀法的工艺；2 优化葡聚糖凝胶层析法的工艺；3 蛋白纯度的检测与活性的验证。
三 主要研究方案1有机溶剂沉淀法结合等电点沉淀法分离载脂蛋白1.1 溶液的配制与预实验1.1.1溶液的配制（1）PH5.5的10mMPBS缓冲液：精确称取NaCl 4.000g，KCl 0.100g，KH2PO40.650g，Na2 HPO4 0.100g，加入450ml适量去离子水，调节PH至5.5，500ml容量瓶中定容。
（2）PH6.6的10mM PBS缓冲液：精确称取NaCl 4.000g，KCl 0.100g，KH2PO40.425g，Na2 HPO4 0.670g，加入450ml适量去离子水，调节PH至6.6，500ml容量瓶中定容。
（3）PH8.0的10mM tris-HCl缓冲液：精确称取KCl 0.745g，EDTA 0.037g，Tris 0.120g，加入80ml去离子水，调节PH至8.0，100ml定容。
1.1.2预实验方法：1 称取20gFIV沉淀，加50ml PH5.5的PBS缓冲液，充分溶解后，加入16.6ml乙醇（25%）继续溶解适当时间，12000r/min离心10min。
2 弃去上清液，沉淀用50ml PH6.6的PBS缓冲液充分溶解后，加入4.4ml乙醇（8%）继续溶解适当时间，12000 r/min离心10min。
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