背景介绍:
和厚朴酚为中药厚朴中的主要活性成分之一,具有明显的,持久的中枢性肌肉松弛、中枢神经抑制作用,抗炎,抗菌,抗病原微生物,抗溃疡,抗氧化,抗肿瘤,抑制吗啡戒断反应,可抑制血小板聚集等药理作用。神经性疼痛是临床常见的一种慢性疾病。TTX不敏感性(TTX-R) 钠电流在疼痛中起着重要作用。本课题在急性分离的小鼠背根神经节上,应用膜片钳技术,观察和厚朴酚对TTX-R钠电流的作用,从而研究其镇痛的作用机制。
研究意义:
背根神经节(DRG)细胞是一类具有假单极结构特征的初级感觉神经元,外周感觉信息起始于它的外周末梢并从外周向中枢传导至脊髓背角,借中枢末梢释放的神经递质作用于突触后靶细胞,对感觉信息进行初步加工,完成初级感觉信息的传递。
由于DRG 神经元在痛觉信息传递中起着特别重要作用,而DRG神经元上表达多种离子通道,其中钠通道在神经损伤和炎症伴随的疼痛状态中发挥着重要的作用,所以在DRG细胞膜上促使动作电位产生传导痛觉信息的主要离子流—电压门控性钠通道的研究正受到国内外研究者越来越多的追捧。近些年来,钠通道也成为神经病理性疼痛治疗的重要靶点。
根据对河豚毒素(TTX)敏感性的不同,将DRG细胞上的钠通道分为两种:TTX不敏感型(TTX-R)和TTX敏感型(TTX-S)。TTX-R钠通道电流主要由2种亚型Nav1.8和Nav1.9介导,而TTX-S钠通道电流则主要由Nav1.1、Nav1.6和Nav1.7介导。研究表明,TTX-R钠通道由于具有活化阈较高、从失活态复原快以及失活速率慢等特点,使得其在伤害性传入神经元的兴奋性产生中起着比TTX-S 钠通道更为重要的作用。而在疼痛发生机制中,炎症性慢性痛和神经病性疼痛亦与TTX-R 钠通道密切相关。 直接应用可激活痛觉过敏的炎症介质,可降低TTX-R 钠通道的活化阈值,增加活化和失活的速率,增加TTX-R钠电流的电流量,促进初级传入神经元敏化。
本实验通过急性分离小鼠背根神经节细胞,采用膜片钳技术记录小鼠DRG细胞TTX-R细胞钠通道电流,观察和厚朴酚对TTX-R钠电流的影响,研究厚朴酚镇痛的作用机制。
研究内容及方法:
分离小鼠的单个DRG细胞,进行全细胞膜片钳记录,记录TTX-R钠电流,给予和厚朴酚后,观察和厚朴酚对TTX-R钠电流及其通道动力学的影响。
1、单个DRG细胞的分离。
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