开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
- 研究背景
益智仁为姜科( Zingiberaceae) 山姜属植物益智( Alpinia oxyphylla Miq. ) 的干燥成熟果实,含有多酚类、氨基酸以及黄酮类等多种化学成分,主产于海南、广东、广西等地。中医认为其有温脾止泻、摄唾涎、固精缩尿等功效,药理研究表明该植物具有强心、抗氧化、抗炎、抗癌、神经保护、镇痛、抗溃疡等作用[1,2]。沙棘果是藏族和蒙古族常用药材,秋、冬二季成熟或冻硬时采收,具有健脾消食,止咳祛痰,活血散瘀的功效[3]。罗汉果是我国特有的经济及药用植物,主要产于广西、广东等地区。其性凉味甘,无毒,有润肺止咳、凉血、润肠通便[4]的功效,对治疗百日咳、慢性气管炎、咽喉炎、胃肠疾病疗效显著。目前,关于三种植物(沙棘、罗汉果和益智仁)及其提取物的研究多集中于对其化学成分的分析和对其药理作用的探讨,而对这三种植物复配液的协同抑菌活性以及有效抑菌成分的研究相对不足。
- 研究目的
金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌[5],是常见食品污染菌,隶属于葡萄球菌,属有“嗜肉菌'的别称,是革兰氏阳性菌的代表,其可存在于多种食物中并引起许多严重感染[6]。罗汉果、沙棘和益智仁作为药用植物,具有一定的药用价值。同时三种植物的复配液有一定的抑菌作用,本实验以金黄色葡萄球菌为指标菌,研究复配液中的有效抑菌成分,为以后复配液在食品防腐保鲜方面的应用提供实验数据和理论支撑。
- 研究内容
选用罗汉果、沙棘和益智仁三种植物作为原料,先将提取液进行复配,得到抑菌能力强的复配液。再萃取复配液的不同极性部位,利用抑菌试验选择抑菌效果最好的萃取相。应用TLC摸索柱分离条件,合并具有相同比移值(Rf)的收集液。根据各收集液抑菌试验结果,选取最佳部分继续分离,进行多极柱分离纯化后,应用UV、HPLC和HPLC-MS对有效抑菌成分进行初步分析。
- 实验设计方案
4.1 有效抑菌成分提取
沙棘、罗汉果、益智仁分别烘干粉碎过60目筛后置于阴凉干燥处备用[7],分别称取沙棘粉末15.000g、罗汉果10.000g、益智仁5.000g,用水、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇依次超声辅助提取3次,时间分别为2、1、0.5 h,料液比为1:10(g/mL),抽滤[8]。减压旋蒸浓缩后,配制成1g/mL的复配液进行抑菌效果(金黄的葡萄球菌)的测定。应用管碟法测定抑菌圈[9],根据抑菌效果作表格,结合提取溶剂极性确定抑菌效果最好的萃取相。
4.2 分离纯化实验
4.2.1 装柱
将经过预处理的D101大孔吸附树脂浸泡在 95%乙醇中,过滤,称量15 g 湿树脂,乙醇湿法装柱(1.5 cmtimes;20 cm),用乙醇洗脱,直至流出的乙醇用水稀释不混浊为止(取1mL乙醇加5mL水),用纯化水洗至无醇味,备用[10]。
4.2.2 复配液的预处理
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