开题报告一 题目 毕赤酵母发酵工艺研究二 选题的目的、依据及意义 毕业设计是对自己所学专业课和自己今后要从事的工作方向的一次综合性训练，也是对自己四年所学的一次检测。
是学生综合素质与工程实践能力培养效果的检验；也是学生从学校学习到岗位工作的重要过渡环节。
巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）是一种能高效表达外源蛋白的表达系统，具有遗传稳定性、表达水平高、蛋白翻译后可加工、产物可分泌、可进行高密度发酵等优点[1]。
是目前最优秀、应用最广泛的外源基因表达系统之一，它不但克服了大肠杆菌表达系统不能表达结构复杂的蛋白质、表达的蛋白多形成不溶性包涵体、背景蛋白多、表达产量低等缺陷，弥补了哺乳类细胞、昆虫细胞表达系统操作复杂、表达水平低、产业化生产造价昂贵的不足，还具有其他酵母表达系统无法比拟的优越之处。
现将毕赤酵母表达系统优点概括如下:1.毕赤酵母更接近高等真核细胞, 不含内毒素和其他有害物质, 使用安 全;2.同酿酒酵母一样, 繁殖速度快, 对培养条件要求低, 培养基价廉, 能 进行高密度培养, 且能耐受较高的液体静压, 便于工业化生产;3.该系统的载体能与核基因组进行整合, 因此构建的菌株较稳定, 一般 不会在传代过程中出现丢失现象;4.在毕赤酵母中表达的蛋白既可存在于胞内, 又可在分泌信号作用下将 蛋白分泌至胞外;5.具有强有力的易控制的乙醇氧化酶基因(AOX1)或磷酸甘油酸脱氢酶 ( GAP) 基因启动子作为外源基因启动子, 可对外源蛋白的表达进行严 格调控;6.作为真核表达系统, 可对表达的外源蛋白进行翻译后的加工和修饰, 即二硫键的形成、脂肪的酰化、蛋白磷酸化、折叠、信号序列加工、N 糖基化、O糖基化, 从而使目的蛋白具有所应有的生物学活性;7.外源蛋白表达量高, 同时自身分泌的背景蛋白少, 表达产物易于纯化;8.和酿酒酵母相比, 毕赤酵母中加到翻译蛋白上的糖链长度平均每条侧 链为8～14个甘露糖残基, 比酿酒酵母每条侧链平均50～150个甘露糖 残基短得多。
毕赤酵母极少出现过渡糖基化, 可避免外源蛋白生产过强 的免疫原性或因糖链过长干扰外源蛋白正确折叠而影响其功能, 而且糖 链中不含具有致敏作用的alpha;21, 32甘露糖, 使其使用更加安全。
酵母作为一种最简单的单细胞真核生物, 兼有原核生物和真核生物的某些优点。
毕赤酵母生活史与酿酒酵母十分相似。
这使得毕赤酵母的发酵工程部分可与酿酒酵母相同, 从而节省了重新购置设备和进行新技术探索的巨额花费, 这是用其他方法进行大规模商品化的外源蛋白生产所不能比拟的优势。
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