开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
一、课题的研究背景、意义和目的
在人类基因组中约98%的基因能被转录而不能被翻译为蛋白序列,这类RNA被称为非编码RNA(noncoding RNA, ncRNA)。长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)是继miRNA后被发现的一类具有调控功能的ncRNA,这是一类长度大于200核苷酸且不具备蛋白编码能力的非编码RNA。研究发现lncRNA在机体各个调控层面上发挥着重要的调节作用,其参与基因水平、转录水平以及蛋白质水平的调控过程,进而影响机体的生理及病理过程。lncRNA的异常表达往往与疾病的发生及发展密切相关,许多研究已表明在肿瘤、心血管、神经退行性等疾病的发生、发展过程中lncRNA扮演了重要角色。自身免疫性疾病是继肿瘤和心血管疾病之后的第三大类危害人类健康的疾病,影响全球约5%的人口,至今自身免疫性疾病的发病机制依旧尚未阐明。近几年,lncRNA在免疫系统调控以及免疫相关疾病中的关键作用已有许多报道,然而关于lncRNA与自身免疫性疾病的相关研究才刚起步。
课题组前期利用lncRNA芯片检测自身免疫性脑脊髓炎模型组与正常组之间差异lncRNA,并完成差异lncRNA筛选,共获得3条候选显著差异上调lncRNA。在前期工作的基础上,本课题拟进行候选lincRNA基因的shRNA序列设计,构建包含不同shRNA序列的慢病毒表达系统,完成重组干扰慢病毒的包装及鉴定,为后期候选lincRNA的功能研究奠定基础。
二、课题研究的主要内容
1、针对候选lncRNA设计shRNA序列。
2、构建干扰慢病毒载体并进行慢病毒包装。
3、通过荧光显微镜以及流式细胞术检测慢病毒包装效率。
三、研究难点
1、shRNA序列筛选及设计
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