重组风疹病毒蛋白E1的纯化及鉴定文献综述

 2023-02-13 22:52:14

开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)

风疹病毒(RV)

风疹病毒(rubella virus)是孕妇宫内感染常见病毒,也是TORCH的病原体之一。TORCH是指宫内感染及围产期感染致胎儿畸形的病原体,主要有Toxoplasma弓形虫,Rubella.Virus是风疹病毒,Cytomegalo.Virus是巨细胞病毒,Herpes.Virus即是单纯疱疹I/II型。风疹病毒传播途径为呼吸道和胎盘,感染妊娠早期妇女会导致其流产或胎儿患先天风疹综合征(即CRS综合征),表现为白内障、耳聋、心脏病及先天性畸形等。风疹病毒是披膜病毒科风疹病毒属中的唯一成员,人类是唯一宿主[1],除感染胎儿及孕妇外,风疹病毒还是儿童常见传染病,症状表现为皮疹及发热。

RV为单股正链RNA病毒,基因组含9762个核苷酸,基因组5末端含帽结构,3末端有polyA尾[2],RNA的5端编码非结构蛋白,3端编码结构蛋白。病毒分子为有外膜的球形结构,直径6070nm;核衣壳呈二十面体对称,直径为30nm。[3]1963 年首次从 Vero 细胞中分离得到[10]

RV含C、E1、E2三个结构蛋白,C是风疹病毒的衣壳蛋白,E1、E2是RV的外膜糖蛋白,即E1蛋白与E2蛋白组成的异二聚体在结合病毒外膜上[3-4]。E1和E2的基因主要集中在3端的翻译区。E2与病毒颗粒形成有关,而细胞侵袭相关能力主要由E1决定[2],因此尽管三个蛋白各自含有许多抗原表位,E1蛋白的胞外区已经含有完整抗原性,在体内可独自诱导淋巴细胞产生抗体,安全性较完整RV病毒高,多用于基因工程亚单位疫苗,已成为近年研究热点;E2与人的髓鞘质同源,可能为脱神经髓鞘自身免疫疾病的病因之一[3]。E1含481个氨基酸,相对分子质量为57KD,富含脯氨酸和半胱氨酸。E1蛋白分为含22个氨基酸的跨膜区(aa447-468)和由13个氨基酸组成的胞浆区(aa469-481)[4]

诊断及检测的情况

现主要的诊断方法有:

1、ELISA检测

ELISA作为灵敏快速的检测方法,广泛应用于病毒检测中。孕妇感染风疹病毒会产生特异性IgM抗体,检测IgM抗体是目前最常用的方法[5]。ELISA检测的灵敏度与抗原及血清中抗体纯度都有关,在ELISA中包被的抗原有天然风疹病毒抗原,但因为细胞蛋白在抗原纯化中难以除去,给检测灵敏度和特异性造成一定影响,因此应用基因工程重组风疹病毒E1抗原对检测结果的影响更好[6];若检测血清中含有类风湿IgG,检测结果可能出现假阳性,检测前可以分离纯化血清中IgM,(如利用蛋白快速层析法)[5]。此外,利用风疹IgG抗体也可进行ELISA检测[8]

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