Chloroeremomycin的菌种的基因工程改造及发酵工艺研究文献综述

 2023-01-05 20:07:28

立题依据

鉴于临床上耐药菌的产生，国内外已将目光投向对抗耐药菌的抗生素的开发，糖肽类抗生素如万古霉素的组合生物合成研究越来越受关注，一些合适的载体质粒的构建和转化方法的优化为产生菌的遗传操作系统的建立奠定了基础。利用基因工程手段，通过对Chloroeremomycin的产生菌东方拟无枝酸菌进行基因改造，获得万古霉素类似物成为可能，本课题作为研究的初期工作，主要是对万古霉素结构类似物Chloroeremomycin产生菌的分子生物学研究，探索构建基因工程菌的可能性，并通过对万古霉素卤代酶基因的表达和工程菌发酵调控的研究，探索提高Chloroeremomycin产量的新方法。

研究内容

本课题的研究内容如下：

  1. 万古霉素卤代酶合成基因插入到Chloroeremomycin生物合成基因簇中的研究。
  2. 构建表达载体，通过接合转移使新合成的基因整合到东方拟无枝酸菌的基因组中。
  3. 检测产物Chloroeremomycin是否有表达，以及表达量是否相对提高。
  4. Chloroeremomycin高产菌株的筛选以及发酵工艺优化。

研究手段

  1. 菌种的培养和保藏
  2. Peva-Pset152质粒提取、双酶切；重组基因的双酶切；基因片段连接.
  3. 琼脂糖凝胶电泳
  4. 大肠杆菌质粒转化（CaCl2）
  5. 东方拟无枝酸菌-大肠杆菌接合转移
  6. HPLC分析
  7. Chloroeremomycin产生菌的发酵培养和产物分析

主要成果形式

1.接合转移完成后基因组分析结果为重组基因成功整合到产生菌基因组中。

2.产生菌经过培养和发酵工艺优化，能够表达目标产物，并且产量相对提高。

工作进度：

  1. 3-4月，对甘油管保存的Peva-pset152大肠杆菌转化培养；

质粒提取跑电泳确定质粒浓度；

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