Sn10和Sn11基因的分子克隆及表达文献综述

 2023-01-03 20:16:55

一、 研究内容固有免疫(innate immunity)是机体在种系发育和进化过程中形成的天然免疫防御功能,即出生后就已具备的非特异性防御功能,也称为非特异性免疫(non-specific immunity)。

是生物在长期进化过程中形成的一系列防御机制。

固有免疫在病原体的识别和激活适应性免疫的过程中起着关键并不可或缺的作用。

影响固有免疫的因素有许多,本课题利用分子克隆等手段探讨Sn10和Sn11基因编码的蛋白对固有免疫的影响。

这我们的毕业设计任务就是:1.目标基因的引物设计2.分子克隆3.构建目的基因的连接产物并表达,蛋白质的初步研究 分子克隆技术是本实验需要重点攻克的难题,它是在分子水平上提供一种纯化和扩增特定DNA片段的方法。

将目的基因用体外重组方法将它们插入克隆载体,获得连接产物,通过转化与转导的方式,引入适合的宿主体内得到复制与扩增,然后再从筛选的宿主细胞内分离提纯所需的克隆载体,可以得到插入DNA的许多拷贝,从而获得目的基因的扩增。

它包括PCR引物设计,以及PCR产物回收,酶切连接,质粒提取,大肠杆菌感受态转化等。

很多环节会影响实验的成败,如酶切的好不好、回收的质量好坏、连接时的浓度或比例、感受态等。

二、研究方法与技术路线根据目的基因序列进行引物设计 利用PCR进行分子克隆,构建含有目的基因的连接产物并测序鉴定 转入大肠杆菌中进行扩增 提取所需质粒后,转染细胞,表达并纯化,利用western blotting进行蛋白的初步功能研究 三、课题研究进度安排2017年2月27日 - 3月5日,查阅文献,确定选题2017年3月5日 - 3月15日,撰写开题报告,熟悉基础实验技能2017年3月15日 - 5月15日,完成课题研究2017年5月16日 - 5月25日,完成毕业论文初稿2017年6月8日前,完成毕业论文终稿,完成毕业论文答辩 四、文献综述固有免疫是人体抵御病原微生物入侵的第一道防线,宿主通过模式识别受体(PRR),例如Toll样受体(TLR),RIG-1样受体,DNA识别受体,识别病原相关分子模式(PAMP),例如细菌的脂多糖与病毒的核酸等。

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