关于A品种热原方法学的研究
热原（pyrogen）是注射后能引起人及恒温动物体温异常升高物质的总称。通常所指的热原，主要是指细菌性热原，是某些细菌的代谢产物、细菌尸体及细菌内毒素。细菌内毒素（endotoxin）是热原之一，也是至今发现在水溶液中最普遍的热原。细菌内毒素检查法（鲎试剂法）是近二十年来发展起来的用于检测药品及其中间品中内毒素污染的一种方法。与家兔法比较，有劳动强度低、快捷、经济、灵敏和易于标准化等优点。企业生产中，鲎试剂法是常用的检测药品内毒素的方法。不同药品所选择的的鲎试剂法不同，因而探讨出适合相应药品内毒素检查的方案，是极其重要的事情。
1968年LivenJ.和BangF.建立了鲎试验法。1973年美国FDA制定了鲎试验准则，阐明鲎试剂是一种检测细菌内毒素的灵敏指示剂。1980年美国FDA发布用鲎试剂检查人用和兽用注射剂成品内毒素的准则。1984年美国药典增补本中，修订了该检查法。欧洲药典于1987年、英国药典1989年增补本分别收载了细菌内毒素检查法。1990年日本药局方增补本也收载了这一方法。在我国，1975-1982年是鲎试剂的研究阶段。1988年卫生部颁布细菌内毒素检查法[1]。1993年中国药典1990年版第2增补本收载细菌内毒素检查法[2]。2010版中国药典规定细菌内毒素检查法的品种，二部有424个，三部有39个[3]。由此可见，在药品内毒素检查当中，鲎试剂法越来越受关注。
中国药典2010版附录XIE中介绍，细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法。后者包括浊度法和显色基质法。供试品测验时，可使用任何一种方法进行试验。当测定结果有争议是，除另外规定外，以凝胶法结果为准[3]。本课题研究的是利用凝胶法检测细菌内毒素。
凝胶法是利用鲎试剂来检测或量化细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。鲎试剂即鲎血液提取物的冻干品，主要含有5种蛋白。其作用机理是，鲎血细胞内充满细胞浆颗粒，颗粒中含有能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原、凝固蛋白原、B因子、C因子等。内毒素激活C因子，活化的C因子又激活B因子（C因子系统），或由（1-3）-D葡聚糖激活G因子（G因子系统）；活化的B因子或G因子再去激活凝固酶原，使凝固酶原转化成凝固酶，凝固酶切断凝固蛋白原中特定的精氨肽链，形成凝固蛋白产生凝胶[4]。内毒素检查法结果准确与否与所用鲎试剂的灵敏度相关性很大[5]，而鲎试剂的灵敏度与它的正确使用又密切相关。因此要严格执行鲎试剂的质量标准，规范使用鲎试剂。
本课题涉及的内容有：鲎试剂灵敏度复核试验，关于A品种的凝胶法干扰试验，供试品和内毒素标准品稀释试验。方案的实行，主要是以中国药典2010版附录XIE细菌内毒素检查法为基础，辅以相关文献，设计出可操作方案。灵敏度复核目的不仅是考察鲎试剂灵敏度是否准确，也是考查检验人员操作方法是否正确及实验条件是否符合规定。要求在使用一批新的鲎试剂前必须进行鲎试剂灵敏度复核，只有复核通过了，才会将其投入使用。凝胶法干扰试验目的是确定供试品在多大的稀释倍数或浓度下对内毒素和鲎试剂的反应不存在干扰作用，为能否使用细菌内毒素检查法提供依据。
凝胶法成功与否与很多因素有关，其中影响因素有：1.混合液的pH6.08.0才能形成最佳凝集；2.保温温度应为(371)℃[6]；3.保温时间为(602)min[6]；4.在鲎试验过程中应防止使试管受到振动；5.所用器皿均应彻底洗涤和冲洗干净；6.阳性对照存在；7.鲎试剂的贮存。虽然冻干的鲎试剂在常温条件下是相对稳定的，但还是应存放在2-8℃下，避免长时间放置在高于25℃的温度条件下导致因贮藏不当、质量下降而引起的检验误差[7]。
在实际操作中，必然会遇到各种各样的困难，唯有不断地思考总结，才能将课题做好！
参考文献
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