开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
●拟研究的问题:
1、构建galectin-3原核表达载体,并进行表达、分离纯化出galectin-3,用于ELISA筛选模型的建立。
2、初步建立一套ELISA方法的galectin-3抑制剂的筛选模型,用于检测Galectin-3的抑制率,为galectin抑制剂的研发及其抗肿瘤侵入与转移药效评价建立基础。
●采用的研究手段:
1、购买克隆质粒,经过PCR扩增,获得编码cDNA,构建有组氨酸(His)标签或谷胱甘肽s-转移酶(GST)标签修饰的Galectin-3基因序列的表达载体。
2、利用亲和层析的方法进行分离纯化得到galectin-3。
3、利用ELISA方法测定Galectin-3与去唾液酸胎球蛋白(asialofetuin)亲和常数后,选取一定浓度的Galectin与asialofetuin进行结合反应,再利用竞争性ELISA测定不同抑制剂的IC50,建立筛选模型。
●文献综述:
Galectin-3的制备及其抑制剂的筛选模型研究
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