开题报告内容:(包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述,不少于2000字)
课题背景:
炎性肠病(IBD)是一类病因不明的慢性肠道炎症性疾病,由于具有恶变倾向因而对患者造成非常严重的威胁,是胃肠道中除恶变外最严重的疾病之一。IBD主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。其发病率在欧洲和北美最高,在亚洲等 地区也呈逐年上升的态势[1]。IBD确切的病因和发病机制尚不清楚,可能的致病因素包括环境微生物因素、免疫因素和遗传因素。目前,通过外源化学物刺激诱导肠黏膜产生免疫反应来建立IBD模型 是较常用的方法。有研究报道利用2,4,6-三硝基 苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonicacid,TNBS)诱导的IBD模型与人类的CD相似[2]。本研究利用 TNBS诱导建立了炎性肠病大鼠模型并对该模型进行了初步评价。三硝基苯磺酸(TNBS)是一种弱有机酸,属于半抗原,单独在体内不能诱导免疫应答,只有在与组织蛋白等高分子物质结合后才能诱发免疫反应,实验中乙醇作为肠黏膜屏障的破坏剂,使得TNBS与肠黏膜角蛋白结合成全抗原,从而激发局部免疫反应[3]。TNBS造成的肠损伤与人类的CD在发病机制、病理特点及临床表现等方面相似,其典型特征是结肠发生透壁性坏死和广泛的炎性细胞浸润,并且伴随着体重的持续下降[4]。
长双歧杆菌(B.longum)属放线菌科双歧杆菌属,革兰氏阳性杆菌,G C%含量高,专性厌氧,是人体健康肠道内的一种产酸性益生菌[5]。它能帮助我们在日常生活中抵御外来的多种肠道感染。由于其厌氧的生长环境,它能在缺氧的实体肿瘤部位聚集与生长。多篇报道中显示长双歧杆菌在多种肿瘤中(如结肠癌,乳腺癌和肝癌)有抑制肿瘤生长的作用[6]。本实验将探究其在小鼠肠道中对肠炎有无防治作用
硒元素(Se)是人和动物体内一种至关重要的微量元素,现已证实很多疾病的发生与体内硒元素的不足有着紧密的联系[6]。硒元素是体内谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成部分,它能催化过氧化氢和有机过氧化物反应生产水和相应的醇类。正是由于硒这种抗氧化和助氧化的作用,使得其在抑制肿瘤生长方面有一定的作用[7]。有相应报道中显示硒元素在瘤鼠中对其免疫功能以及抵抗肿瘤的生长有一定的作用。
本课题主要研究富硒长双歧杆菌对小鼠肠炎模型的防治作用。我们构建TNBS诱导的C57 BL/6J小鼠肠炎模型,将小鼠分组:Normal组,model组,阳性对照组(柳氮磺嘧啶灌胃),富硒长双歧杆菌低剂量组(0.75X1010个/Kg)、富硒长双歧杆菌中剂量组(1.5X1010个/Kg)、富硒长双歧杆菌高剂量组(3.0X1010个/Kg)、无硒组中剂量。小鼠造模前5d给予长双歧杆菌,造模后2d继续给药,给药后观察小鼠的体重,结肠的长度,结肠切片HE染色并给予评分,根据指标看富硒长双歧杆菌对肠炎的防治作用效果。
实验流程:
- 造模前给药
- (富硒)长双歧杆菌的培养(配方保密)
- 小鼠分笼,并以3*10^10个/ml,1.5*10^10个/ml,0.75*10^10个/ml的浓度给每只小鼠灌胃100mu;l.
2.TNBS结肠炎模型的诱导
将C57 BJ/6小鼠按体重随机分组,,禁食8-20h,自由饮水,轻度乙醚麻醉,用16号灌肠针插入肛门约4cm,注入100微升含1.0mg 2,4,6一三硝基苯磺酸(TNBs)的50%乙醇溶液,灌入药物后停留数秒钟,将灌胃针缓缓拔出,整个操作过程在30秒内完成。拔出灌肠针后,立即倒立60s,然后动物放回笼内饲养;对照组动物则注入等体积50%的乙醇溶液
3.取材及指标观察
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