基于LC-MS/MS检测人体血浆中的阿法替尼的方法建立及应用文献综述

 2022-12-16 17:58:36

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

  1. 课题背景

肺癌是全球范围内最为常见和最为致命的一种癌症, 每年的新发病例数达到161万, 占全部癌症的12.7%。由于肺癌预后较差, 每年由肺癌导致的死亡人数多达183万, 占所有癌症死亡人数的18.2%。非小细胞肺癌 (NSCLC) 则占肺癌总数的80%~85%, 使其成为肺癌中最常见的形式。有10%~15%的白种人NSCLC患者和40%的亚洲NSCLC患者的肿瘤存在表皮生长因子受体 (EGFR) 的的基因突变, 其中约有90%的病例伴有2种EGFR突变中的一种 (外显子19缺失或外显子21 (L858R) 置换突变)。

2013年7月12日, 美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准勃林格殷格翰公司研发的阿法替尼作为一线治疗药物上市,用于存在肿瘤表皮生长因子受体 (EGFR) 外显子19缺失或外显子21 (L858R) 置换突变的转移性非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者。2017年3月，阿法替尼在中国获批上市。

本品不可逆地与Erb B1,Erb B2和Erb B4激酶域共价结合,并且不可逆地抑制酪氨酸激酶自身磷酸化,导致表皮生长因子受体(Erb B)信号下调。当本品在患者体内达到(或至少暂时达到)一定浓度时,可抑制自身磷酸化,在体外试验中,本品可抑制野生型EGFR细胞株的增殖或者选择性EGFR外显子19缺失或外显子L858R置换突变(包括部分伴二级T790M突变)的细胞株增殖。此外,本品还能抑制过表达的HER2细胞增殖。本品主要用于具有表皮生长因子受体(EGFR)基因敏感突变的局部晚期或转移性非小细胞肺癌 (NSCLC)，既往未接受过EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗以及铂化疗期间或化疗后疾病进展的局部晚期或转移性鳞状组织学类型的非小细胞肺癌(NSCLC)。本品的一般耐受性良好, 其最为常见的不良反应为腹泻、皮疹/皮炎、痤疮、口腔炎、甲沟炎、食欲减退等。

现有对人体血浆中阿法替尼的浓度主要通过HPLC-UV法等测定，灵敏度一般，而且处理样品比较繁琐。液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术自Horning等于70年代进行开创性研究工作以来，经过20多年的发展已趋向成熟，应用日益广泛。它以LC为分离手段，MS为检测手段，集LC的高分分离能力与MS的高灵敏度、高专属性于一体，已成为药物杂质检查、体内药物代谢、代谢产物的药物代谢动力学研究和结构研究等现代药学前沿领域中最强有力的分析工具之一。应用LC-MS连用技术可获得复杂混合物中单一成分的质谱图，大大有利于药物杂质、药物代谢和内源性化合物的分离和鉴定，尤其适用于对血浆样品中的药物浓度进行定量和定性分析。相对LC-MS，液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）也是痕量分析领域中的一种最有效的分析技术，它有二级以上的质量分析器串联组成，也是将分离和鉴定融为一体的分析方法，特别适合痕量组分的分离和结构鉴定。在这种多级质量分析模式下，LC-MS/MS的优势主要有：

  1. LC-MS/MS有更好的专属性，选择性和灵敏度。
  2. LC-MS/MS对样品的纯度要求低，可适当的简化样品前处理的程序，缩短分析时间。
  3. LC-MS/MS的定性功能更加完善，不经可以得到代谢物的质谱图，还可以得到其裂解产物的质谱图，而且通过操作模式的改变可以进行化合物的归属及结构研究。

因此，可以使用LC-MS/MS法较为精确的测定人体血浆中阿法替尼的浓度，并将该方法应用至阿法替尼片人体药代动力学的研究。

  1. 要解决的问题
  2. 建立专属性强、灵敏度高的液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS)的测定人血浆中阿法替尼的浓度。
  3. 应用该方法至阿法替尼片人体药代动力学的研究。
  4. 可行性分析
  5. LC-MS/MS拥有较好的专属性，选择性和灵敏度；在对人体血浆中的药物检测时，该方法对样品的纯度要求低，可适当的简化样品前处理的程序，缩短分析时间。
  6. 所在实验室已成功对多种药物进行检测，可提供检测仪器和实验环境。
  7. 指导老师丁黎教授在色谱分析领域有深入的研究。
  8. 研究方法和内容
  9. 查阅文献，熟悉掌握阿法替尼的结构及其理化性质。
  10. 初步对阿法替尼的标准溶液进行LC-MS/MS检测
  11. 优化各项检测条件和参数
  12. 建立和优化LC-MS/MS定量分析人体血浆内阿法替尼的浓度

建立和优化方法时采用的实验步骤概括如下：

  1. Q1扫描确定母离子的质荷比 根据地拉罗司的性质，选择分析的极性（ 或-）、离子化方式（ESI或APCI）,根据分子量选择扫面范围和时间，确定母离子的质荷比，准确到小数点后一位。
  2. 子离子扫描确定子离子的质荷比 获得高质量的二级质谱图，以母离子的强度为MS图谱中峰强度的1/3到1/4为宜，平滑后选择子离子质荷比，准确到小数点后一位。
  3. 优化地拉罗司参数 根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对；选择多个离子对时，应合理分配每一对的分析时间；用“Ramp”，优化Compound项下各参数，以及Source项下CAD参数。各离子对应分别设定；初步建立MRM方法；一般优化两次，已得到比较准确的结果。
  4. 优化离子源参数。
  5. 优化色谱条件 接色谱柱，用适当浓度样品考察分离情况，MRM方式可以不必所有峰都基线分离，但要注意避开介质离子抑制的干扰；调整色谱流动相组成和流速，并相应调整源参数。
  6. 工作计划

2月26日—3月15日：完成文献查阅、开题报告等前期工作。

3月16日—5月10日：完成方法建立、条件优化和数据处理等工作。

5月11日—5月20日：完成毕业论文的撰写工作。

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