开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、拟研究概况
支链氨基酸（branched-chain amino acid, BCAA）是指亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸三种分子结构中侧链具有分支结构的必需氨基酸，它们是合成肌肉蛋白质的原料，组成几乎1/3肌肉蛋白[1]，常作为增强肌肉力量的补充剂[2,3]。BCAA的代谢需要一系列酶的参与，在支链转氨酶的作用下，亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸分别转化成各自对应的alpha;-酮酸，即alpha;-酮异己酸、alpha;-酮-beta;-甲基戊酸和alpha;-酮异戊酸，这些酮酸统称为支链酮酸（branched-chain alpha keto acids, BCKA）[4,5]。BCKA在支链酮酸脱氢酶的作用下产生不同的辅酶A（CoA）[6]，这些CoA会参与能量代谢、蛋白质合成等诸多重要生理生化过程[7,8]。
支链氨基酸的代谢异常会引起许多疾病。枫糖尿病、丙酸血症和甲基丙二酸血症等都是由于支链氨基酸的代谢紊乱引起的遗传性疾病[9,10]。此外，有研究表明，一些慢性疾病（如糖尿病）发生时，血浆内的支链氨基酸和支链酮酸的含量升高，表明支链氨基酸的代谢出现异常[11,12]。因此，建立一种准确、快速的分析方法定量测定体内支链氨基酸和支链酮酸的水平对研究与支链氨基酸代谢异常相关的疾病至关重要。
关于氨基酸或酮酸含量测定的方法有许多报道，主要包括高效液相色谱法（HPLC）、核磁共振法（NMR）、毛细管电泳法（CE）、气相色谱-质谱联用法（GC-MS）和液相色谱-质谱联用法（LC-MS）等，这些方法各有优缺点。NMR法无损伤性，不破坏样品的结构和性质，但是需要的样本量较大，方法的灵敏度和选择性较低[13]。CE法需要的样本量较少，分离度高，但是在分析复杂的生物基质时稳定性不理想[14]。HPLC方法是一种具有较好的稳定性和灵敏度的高通量方法，但是分析氨基酸和酮酸时通常要采用衍生化的方法[15]。GC-MS通常用于有机酸的分析，但是分析过程中产生的高温会导致氨基酸的异构化，使测定结果不准确[16]。综合考虑选择性，灵敏度，稳定性和操作的可行性，LC-MS是最佳选择。然而现有的文献报道的LC-MS的方法都无法实现BCAA和BCKA的同时定量测定，所以建立一种有效，快速的LC-MS法同时测定BCAA和BCKA是对现有的氨基酸和酮酸分析方法的补充和拓展。
二、研究方法
本实验拟建立液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定体内支链氨基酸和支链酮酸的水平。通过仔细研究生物样品的色谱行为和提取条件，寻找合适的液相条件和质谱条件，对待测物进行定量测定。该方法需精密度、准确度、稳定性和线性良好，回收率和基质效应符合要求。
1.分析方法的确立
参考文献方法，根据支链氨基酸和支链酮酸的理化性质选用合适的溶剂和内标物（与待测物有相似的色谱行为、提取效率、质谱响应），选择合适的液相条件（色谱柱的选择、流动相的优化）和质谱条件（母离子、子离子、碰撞能量以及各个质谱参数的优化），尽量提高检测灵敏度以适应体内样品的分析。其次，根据体内生物样品前处理的方法，对生物样品处理条件进行优化，以达到检测要求。
2.分析方法的验证
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