开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
一、实验背景
乳腺癌做为现代女性患者中最常见的一种癌症类型，日益受到人们的重视，据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局近年来公布的乳腺癌发病数据显示：乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率（粗率）全国合计为42.55/10万，城市为51.91/10万，农村为23.12/10万。中国抗癌协会公布的数据显示，我国妇女乳腺癌发病率正义3%每年的速度生长。我国癌症的健康负担逐年增长，与其他大多数国家一样，乳腺癌也成为了中国女性最常见的癌症。每年中国乳腺癌新发数量和死亡数量分别占全世界的 12.2% 和9.6%。在全世界科学工作者的不懈努力下，乳腺癌死亡率在逐渐下降，已经成为疗效最佳的实体肿瘤之一。在治疗乳腺癌的研究工作中，需要不断的建立动物的乳腺癌模型，以小鼠乳腺癌为代表的乳腺癌模型的建立与雌激素的补充密切相关。
雌激素是一种甾体类激素，广泛分布于生殖系统、骨骼、心血管系统等，雌激素可以诱导乳腺肿瘤的发生，其诱导乳腺癌发生的机制尚不明确，已知其重要机制之一就是刺激乳癌肿瘤的生长并抑制其凋亡。
MCF-7细胞是最常用的乳腺癌细胞之一，MCF-7做为一种雌激素依赖性的细胞，在接种到小鼠体内前以及接种后，需要为小鼠持续补充雌激素才可以使肿瘤正常生长，从而开展各种研究。目前研究工作中最常用的补充雌激素的方法是在小鼠皮下埋植雌激素药片（17beta;-雌二醇缓释药片—Innovative Research of America），这种药品大约50美金一粒，价格昂贵并且在模型建立的过程中小鼠会出现排尿困难的情况，需要研究员定期为小鼠排尿，并且容易出现尿道感染，小鼠的死亡率随之增加。
本论文在此背景下对MCF-7乳腺癌肿瘤模型的建立以及雌激素的补充方法进行探索和讨论。
三、实验内容
1、细胞的培养。确定MCF-7细胞的培养条件（Medium1640培养基、10%牛血清、37摄氏度 5%二氧化碳）并进行培养，几次传代后收取细胞计数用PBS稀释到细胞数量为每毫升100个million并加Matrigel胶1:1混合，最后得到细胞数量为每毫升50million的细胞悬液。
2、分组接种。选取状态良好的雌性BALB/c nude 小鼠，在符合规定的饲养条件下饲养一段时间后，分为三组每组10只，分为皮下埋植雌激素药片（17beta;-ESTRADIOL缓释药片，0.18mg—Innovative Research of American）组，皮下注射雌激素注射液（苯甲酸雌二醇注射液Estradiol benzoate injection规格4mg/2ml 赤峰博恩药业有限公司）组，和饮水中添加雌激素组（将17mg beta-estradiol溶于2ml无水乙醇中，加18ml水，得到850mu;g/ml贮备液。取4ml贮备液，加400ml水，得到8.5mu;g/ml溶液，用饮用水瓶分装成两瓶，每瓶200ml，供2笼鼠饮用），控制小鼠饮水使其只能饮用添加雌激素的水。皮下埋植雌激素药片需在接种之前进行。每只小鼠接种10个million的细胞（200ul收取的细胞悬液），细胞接种的老鼠右前肩，方便测量。
3、给药、观察、记录小鼠肿瘤的生长情况。接种细胞后，每周一、周五为皮下注射组小鼠注射雌激素注射液40ug（20ul），按时为饮水组更换添加雌激素的饮用水，在肿瘤生长到一定大小后每周选取固定时间测量肿瘤大小并记录生长曲线。
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