烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV)的表达与纯化文献综述

 2023-12-08 10:44:03

文献综述

现状及发展趋势:近年来随着蛋白组学研究的迅速发展,重组蛋白已在各个领域的运用不断增多[1],为了研究目的蛋白的结构与功能,我们通常要将重组蛋白的融合标签去除[2-5],而目前广泛应用的就是利用TEV蛋白酶进行特异性切割[6]。探讨其诱导表达条件从而提高重组rTEV蛋白酶的产量,并且确保rTEV蛋白酶具有活性[7]成为关键问题。

意义和价值:重组型烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围[8]内表现出更好的稳定性和特异性。rTEV是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性,严格识别七氨基酸序列EXXYXQdarr;(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间[7]。普遍应用的七氨基酸序列为:Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Glndarr;-Gly。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6times;His标签,通过Ni-NTA树脂去除,以达到纯化目的蛋白的目的。

参考文献:

[1] Waugh, D. S.Making the most of affinity tags[J]. Trends Biotechnol 2005, 23, 316–320.

[2] Goel, A.Beresford, G. W. Colcher, D. et al. Relative position of the hexahistidine tageffects binding properties of a tumor-associated single-chain Fv construct[J]. Biochim BiophysActa 2000, 1523, 13–20.

[3] Bucher, M. H.Evdokimov, A. G. and Waugh, D. S. Differential effects of short affinity tagson the crystallization of Pyrococcus furiosus maltodextrin-binding protein[J]. Acta CrystallogrD Biol Crystallogr 2001, 58, 392–397.

[4] Fonda, I.Kenig, M. Gaberc-Porekar, V. et al. Attachment of histidine tags to recombinanttumor necrosis factor-alpha drastically changes its properties[J]. Sci World J2002, 2, 1312–1325.

[5] Chant, A.Kraemer-Pecore, C. M. Watkin, R. et al. Attachment of histidine tag to theminimal zinc finger protein of the Aspergillus nidulans gene regulatoryproteiin AreA causes a conformational change at the DNA-binding site[J]. Protein ExprPurif 2005, 39, 152–159.

[6] Kapust R B. Tozser J.,Fox J D. et al. Tobacco etch virus protease: mechanismof autolysis and rational design of stable mutants with wildtype catalyticproficiency[J]. Protein Eng 2001, 14(12) : 993-1000.

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