摘要:单克隆抗体是针对某一特定的抗原表位并由单个B淋巴细胞产生的特异性抗体,此技术建立在杂交瘤细胞的基础上。
这项技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,随着细胞生物学与分子生物学技术的迅猛发展,单克隆抗体制备技术已经被普遍应用于各个不同的领域。
关键词:单克隆抗体;杂交瘤细胞;单克隆抗体的应用1975年, KOHLER等通过杂交瘤技术成功获得了具有抗原特异性的鼠源性单克隆抗体, 从而开启了单克隆抗体开发的新纪元。
单克隆抗体具有专一性高、亲和力强等特点, 已成为多种人类疾病诊断及治疗的重要工具。
[1]1 单克隆抗体的制备原理单克隆抗体是针对某一特定的抗原表位并由单个B淋巴细胞产生的特异性抗体,此技术建立在杂交瘤细胞的基础上。
分泌抗体的功能是由B淋巴细胞承担的,而B淋巴细胞又是有寿命的,不能在体外培养或者动物腹腔中进行无限增殖。
Kohler和Milstein两位科学家为了获得大量的单克隆抗体,通过使用聚乙二醇融合剂或灭活的仙台病毒的方法,使小鼠骨髓瘤细胞(sp2/0)与曾经用绵羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
杂交瘤有两种母细胞的特点,既能够分泌针对某种特异抗原的抗体,又能像无限传代的肿瘤细胞一样能够在体外培养条件下永远存活。
[2]2 利用杂交瘤技术产生单克隆抗体2.1 杂交瘤细胞的制备用构建好的DNA质粒对小鼠进行免疫,免疫后28d至56d分别取血,用ELISA法测定抗体,选择滴度最高的小鼠,,将其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。
[3]融合过程中应保证无菌操作,鉴于此,除了在超净工作台下操作,还必须提前对实验所用的各种工具及器皿进行彻底的消毒。
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