HPLC法测定GCSF蛋白质含量的方法学验证文献综述

课题名称：HPLC法测定GCSF蛋白质含量的方法学验证

一、GCSF蛋白质简介

粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factor,GCSF）首先发现与1980年，Metcalf等在研究中发现内毒素处理过的小数血清或条件培养基中的一种活性成分具有诱导小鼠骨髓单核细胞白血病细胞集落分化的功能。他们进一步纯化得到这种物质，将它命名为粒细胞巨嗜细胞分化因子（granuloycyte-macrophage differentiation factor, GMDF)。此后的研究发现GMDF能够在体外选择性地刺激造血前体细胞分化为粒细胞集落，因此将它改称为G-CSF。这个命名得以沿用至今。G-CSF是一种分子量约为20000的多肽链的糖蛋白，由174个氨基酸组成，主要由内毒素、TNF-alpha;（肿瘤坏死因子-alpha;）和IFN-gamma;（gamma;干扰素）活化单核细胞和巨噬细胞产生。此外，成纤维细胞、内皮细胞、星状细胞和骨髓基质细胞等也可分泌G-CSF。它是一组功能很强的骨髓造血细胞增殖因子，具有刺激中性粒细胞系（lineage）的增殖、分化和成熟以及促进骨髓中中性粒细胞和干祖细胞释放到外周血中等生理作用。

二、拟研究或解决的问题

查询2015年版中国药典通则3124。得到蛋白质含量测定的一般方法，按照药典规定进行实验如下：

用十八烷基硅烷键合硅胶（phenomenex ）为填充剂，孔径30mm，粒径5mu;m，直径4.6mm，长250mm，供试品保存温度为2-8℃，以0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A；以0.1%三氟乙酸乙腈溶液为流动相B，检测波长为214nm，流速：1.0ml/min ，柱温：25℃，进样体积：20l，分别按下表进行梯度洗脱：

表1 流动性梯度（中国药典.M）