一、研究或解决的问题：据文献报道，Noc S1是硫肽类抗生素诺卡沙星生物合成过程中的重要糖基转移酶，负责诺卡沙星母核的糖基化修饰，但其催化机制一直未能阐释。
本课题将以大肠杆菌为宿主菌构建NoS1的异源表达工程菌，通过表达条件的优化，实现目标蛋白的表达，为后续的催化特性和催化机制研究提供蛋白。
二、采用的研究手段：利用大肠杆菌构建工程菌的表达Noc s1，基本过程：1.目的基因的获得PET 22b和PET 28a中存在目的基因片段，设计合适引物，可从中扩增出目的基因。
2.PCR克隆目的基因通过PCR仪克隆目的基因，然后通过电泳鉴别、分离获得目的基因片段。
3.克隆载体的选择通过查阅文献，选择pet 28b sumo、pcold、psj8三种质粒作为载体。
4.目的基因与克隆载体链接对目的基因和克隆载体进行双酶切，然后再用DNA连接酶进行连接。
5.转化把构建好的重组载体通过热激转化入感受态的大肠杆菌，适当培养，获得重组大肠杆菌。
6.扩增培养把获得的重组大肠杆菌用LB固体培养基培养，挑选阳性单克隆菌落，然后接种在LB液体培养基中培养。
7.Noc s1 酶分离鉴定从菌液中分离Noc s1并进行鉴定。
剩余内容已隐藏，您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容！立即支付
以上是毕业论文文献综述，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
