三唑磷的胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制
研究的主要目的和意义:
随着社会的高速发展，在基本解决食物供应的问题的同时，食品安全问题已引起社会的广泛关注。我国作为一个农业大国，农产品贸易在我国经济发展中占 据着很大的比重，而农药是农业生产中不可或缺的重要生产资料，也是实现粮食增长的物质基础。所以农药被大量使用甚至滥用，因此产生的农药残留问题也越来越引起人们的重视，目前在世界上正在使用的 农药近千种，其毒副作用的种类纷繁复杂。
有机磷农药(OPs)作为一类高效、广谱的杀虫剂、除草剂等正被广泛地用于农业，但大量使用后对人、动物和环境产生的危害也日益严重。我国从1956年开始研制生产有机磷农药，现己能生产出40多个品种以供应国内市场，已成为世界农药生产大国之一[1]。自1982年六六六、DDT相继停产、限用、禁用后，有机磷农药的比重就更为突出。目前，由于价格和使用习惯等各种因素，毒性大的有机磷农药仍是主要的农药品种[2]、国内蔬菜中的有机磷农药残留污染己经达到了相当水平。长期食用含过量有机磷农药残留的蔬菜，能抑制人体内组织和血液中的胆碱酷酶活力，使它失去分解乙酞胆碱的功能，结果导致体内乙酞胆碱蓄积，从而引起人的神经传导阻碍、神经麻痹及死亡。据世界卫生组织统计，全世界每年农药中毒人数约300万人，其中有机磷中毒占70%。中国每年农药中毒者约10万人。在中毒人员中，使用有机磷中毒者占89.64%[3]。因此，加大有机磷农药残留检测力度是非常重要的。
有机磷农药残留量的测定主要使用色谱法，包括薄层色谱法[19-20]，气相色谱法[21-24]和液相色谱法[25]。但这类检测方法前处理过程复杂，需要使用大型昂贵的仪器设备，而且需要专业技术人员操作，不适合现场检测和大批量样品的筛选。随着科技的发展和研究的深入，以及国家对食品安全检测技术的重视，方便、快速、经济、可靠的检测新技术新方法不断出现，根据检测原理的不同，目前国内外食品中有机磷农药残留量的快速检测方法主要包括以下几类：化学法、胆碱酯酶抑制法、发光菌检测法、化学发光技术、生物传感技术、生物芯片技术、免疫分析法[9] .
拟研究和解决的问题：
1、熟悉免疫层析试纸条的一般制作流程和方法
- 对本方法进行详细的方法学研究
- 在基本方法上进行优化调试
采用的研究手段及文献综述
1、农药残留免疫快速测定技术及其研究进展
1958年 BersonS.A和Yallow创立了放射免疫分析法(Radio一immunoassay，RIA)，并首先在生物医学和临床药物定量测定上得到广泛应用。由于农药残留分析对象的复杂性，直到20世纪80年代免疫化学分析技术刁lsquo;被逐渐应用于这一领域，免疫学基本原理认为:抗原抗体的免疫反应涉及分子间的立体结构，电荷、氢键及范德华引力作用等多种因素，具有极高的特异性和灵敏性，遵循质量作用定律，不仅可在体内进行，也可在体外进行。这些特点使其能被利用建立免疫化学分析方法:可达到传统理化分析技术无法达到的选择性和灵敏度，并且快速、简便，适于检测生物大分子，也可以检测复杂样本中小分子物质如农药等痕量组分。世界上第一个关于农药残留免疫化学分析的报道是1967年Centeno等制备了杀虫剂马拉硫磷的抗血清，并通过抗原抗体凝集反应证明了抗血清与马拉硫磷的可反应性，但未做应用方面的研究。从1967年到70年代末的10余年间，由于技术上的局限，尽管己开发出了几种农药的免疫化学分析方法，但仍未受到普遍重视，发展相当缓慢。直到1977年，Ercegnvich和Mumma成功地开发了对硫磷的免疫化学分析方法。1980年Hammock和M~a进一步探讨了农药免疫化学分析方法的理论和技术问题之后，农药残留免疫化学分析技术的发展进入了一个崭新的阶段。20世纪80年代以来，由于人们对分析方法的选择性和灵敏度的要求越来越高，同时对分析对象的种类和环境样品的数量要求也在不断增加，具有高度特异性、灵敏性、快速性的免疫化学检测技术在农药分析领域得到了较快的发展。进入上世纪90年代，农药的免疫化学检测技术发展迅速，美、英、德、日、西班牙等国竞相展开这方面的研究，在1990年和1991年，美国化学会(ACS)陆续出版了食品和环境污染物免疫化学分析的两本论文集，标志着免疫化学分析技术在农药残留分析领域应用的新趋势[10]。
近年来免疫分析领域出现了许多更加快速、实用的检测手段，如全自动酶免疫分析装置、免疫分析微球、免疫分析芯片、免疫试纸条等。免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、方便快捷、检测成本低、分析量大、安全可靠等优点，同时，不需要贵重的检测仪器；样品的前处理过程相对简单；不需要专业培训的使用人员；容易普及和推广[4]
2.胶体金免疫层析法
胶体金免疫层析法 (GoldInununoehromatographyAssas， oICA)的原理[5，6]是将各种反应试剂以条带状固定在同一试纸条上，待检标本加在试纸条的一端，将一种试剂溶解后，通过毛细作用在层析条上渗滤、移行并与膜上另一种试剂接触，样品中的待测物同层析材料上针对待测物的受体(如抗原或抗体)发生特异性免疫反应。层析过程中免疫复合物被截留、聚集在层析材料的一定区域(检测带)，通过可目测的胶体金标记物得到直观的显色结果。而游离标记物则越过检测带，达到与结合标记物自动分离之目的
图1 免疫层析试纸条的组成
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