miR-9促进乳腺癌细胞干性的初步研究文献综述

开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）

1. 拟研究或解决的问题

本课题旨在确证miR-9uarr;/STARD13darr;信号轴在乳腺癌肿瘤干细胞（CSCs）形成中的作用及其机制。

2. 研究内容及研究手段

2.1慢病毒质粒构建：运用慢病毒感染方法构建miR-9稳定过表达的乳腺癌MCF-7细胞株（MCF-7^miR-9）、稳定敲减的乳腺癌MDA-MB-231细胞株（MDA-MB-231^{miR-9 antagomir}）、稳定过表达STARD13 3′UTR的MDA-MB-231细胞株（MDA-MB-231^S-UTR）、稳定敲减STARD13的MCF-7细胞株（MCF-7^S-shRNA）。

2.2验证miR-9及STARD13 3′UTR对乳腺癌CSCs形成的调控作用及其机制：在MCF-7^miR-9、MDA-MB-231^{miR-9 antagomir}、MDA-MB-231^S-UTR、MCF-7^S-shRNA细胞中，采用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot、CSCs微球体形成、激光共聚焦等技术，检测乳腺癌CSCs样特性及Rho-GTPase信号的变化情况。

2.3确证miR-9对乳腺癌CSCs形成的调控作用依赖于STARD13 3′UTR：在MCF-7^miR-9、MDA-MB-231^{miR-9 antagomir}分别过表达或敲减STARD13 3′UTR，采用流式细胞术、实时荧光定量PCR、Western blot、CSCs微球体形成、激光共聚焦等技术，检测乳腺癌CSCs样特性及Rho-GTPase信号的变化情况。

3.主要研究方法

3.1慢病毒包装及稳转细胞株的构建

慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体, 属于逆转录病毒科，为RNA病毒。区别于一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。由于体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。基于慢病毒载体设计的shRNA , 转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使有效转染的细胞种类增加，而且长期稳定抑制目的基因在细胞中表达。

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